We are searching data for your request:
Upon completion, a link will appear to access the found materials.
เอ็นไซม์จำกัด
แบคทีเรียจำนวนมากมีเอ็นไซม์ที่จดจำลำดับดีเอ็นเอจำเพาะ (โดยปกติคือ 4 หรือ 6 นิวคลีโอไทด์) แล้วตัดเกลียวดีเอ็นเอเกลียวคู่ที่ลำดับนี้ (รูปที่ (PageIndex{7})) เอนไซม์เหล่านี้เรียกว่าเฉพาะไซต์ เอ็นโดนิวคลีเอสจำกัดหรือพูดง่ายๆ ว่า “เอนไซม์จำกัด” และพวกมันทำงานตามธรรมชาติโดยเป็นส่วนหนึ่งของการป้องกันแบคทีเรียจากไวรัสและแหล่ง DNA ต่างประเทศอื่น ๆ ในการตัด DNA ในสถานที่ที่รู้จัก นักวิจัยใช้เอ็นไซม์จำกัดที่ได้รับการทำให้บริสุทธิ์จากแบคทีเรียหลายชนิด และสามารถซื้อได้จากแหล่งการค้าต่างๆ เอนไซม์เหล่านี้มักจะตั้งชื่อตามแบคทีเรียที่แยกพวกมันออกมาในครั้งแรก ตัวอย่างเช่น, EcoRI และ EcoRV เป็นทั้งเอนไซม์จาก อี. โคไล. EcoRI ตัด DNA ที่มีเกลียวสองเส้นที่ลำดับ GAATTC แต่โปรดทราบว่าเอ็นไซม์นี้ เหมือนกับเอนไซม์อื่นๆ ที่ไม่ได้ตัดตรงกลางของลำดับการจำกัด (รูปที่ (PageIndex{8})) ปลายของโมเลกุลตัดโดย EcoRI มีบริเวณยื่นออกมาของ DNA สายเดี่ยว และบางครั้งเรียกว่า ปลายเหนียว. ในทางกลับกัน, EcoRV เป็นตัวอย่างหนึ่งของเอ็นไซม์ที่ตัดสายทั้งสองเส้นตรงกลางลำดับการรู้จำ ทำให้เกิดสิ่งที่เรียกว่า ปลายทู่ซึ่งไม่มีระยะยื่น
DNA Ligation
กระบวนการของ ดีเอ็นเอ ligation เกิดขึ้นเมื่อสาย DNA เชื่อมต่อกันแบบโควาเลนต์ แบบ end-to-end ผ่านการกระทำของเอนไซม์ที่เรียกว่า ดีเอ็นเอ ligase. โมเลกุลที่ปลายเหนียวซึ่งมีลำดับการยื่นออกมาเสริมกันเรียกว่ามี ปลายที่เข้ากันได้ซึ่งอำนวยความสะดวกในการรวมตัวกันเพื่อสร้าง DNA รีคอมบิแนนท์ ในทำนองเดียวกัน ลำดับปลายทู่สองลำดับยังถือว่าเข้ากันได้ในการรวมเข้าด้วยกัน แม้ว่าจะไม่เชื่อมโยงเข้าด้วยกันอย่างมีประสิทธิภาพเท่ากับปลายเหนียว หมายเหตุ: โมเลกุลที่ปลายเหนียวซึ่งมีลำดับที่ไม่เป็นส่วนประกอบจะไม่เกาะรวมกับดีเอ็นเอลิเกส ดังนั้น Ligation จึงเป็นศูนย์กลางในการผลิต recombinant DNA รวมถึงการสอดชิ้นส่วน DNA ที่มีเกลียวคู่เข้าไปในพลาสมิดเวคเตอร์
