ข้อมูล

เอนไซม์ จำกัด : กรรไกรโมเลกุล


จากปี 1970 มันง่ายกว่าในการวิเคราะห์โมเลกุล DNA ด้วยการแยกเอนไซม์ที่ จำกัด

เอนไซม์เหล่านี้คือ endonucleasesคือภายใน (เพราะฉะนั้นคำนำหน้า Endo- ข้างใน) โมเลกุลดีเอ็นเอโดยการตัดเข้าไปในตำแหน่งที่กำหนดชัดเจน

เหล่านี้เป็นเอนไซม์ที่ผลิตโดยแบคทีเรียที่มีคุณสมบัติในการปกป้องพวกมันจากการบุกรุกของไวรัส สารเหล่านี้มัก "กระตุ้น" โมเลกุล DNA ในบางจุดซึ่งนำไปสู่การผลิตชิ้นส่วนที่มี เคล็ดลับกาวซึ่งสามารถผูกกับปลาย DNA โมเลกุลอื่น ๆ ที่ถูกตัดด้วยเอ็นไซม์เดียวกัน

ในพันธุวิศวกรรมการได้รับชิ้นส่วนดีเอ็นเอทำหน้าที่สร้าง ในหลอดทดลอง (ในหลอดทดลองหรือห้องทดลอง) โมเลกุลใหม่การตัดและการวางข้อมูลต่าง ๆ

หนึ่งในเอนไซม์ข้อ จำกัด แรกที่จะแยกได้คือ EcoRIผลิตโดยแบคทีเรีย Escherichia coli. เอนไซม์นี้รู้จักลำดับเท่านั้น GAATTC และมักจะทำหน้าที่ระหว่าง G และ A แรก

ไซต์ "ตัด" ซึ่งเป็นไซต์ของเอนไซม์เรียกว่าไซต์เป้าหมาย คุณอาจถามว่าทำไมเอนไซม์นี้ไม่ทำหน้าที่เกี่ยวกับ DNA ของแบคทีเรียเอง? สิ่งนี้ไม่ได้เกิดจากการมีเอ็นไซม์ป้องกันอื่น ๆ ที่ป้องกันการทำงานของเอ็นไซม์ จำกัด บนสารพันธุกรรมของแบคทีเรีย

เอนไซม์ที่ จำกัด นั้นจะรับรู้และดำเนินการตามลำดับดีเอ็นเอเฉพาะโดยการเร่งการทำลายพันธะฟอสฟอรัสระหว่างสองฐานต่อเนื่องที่ถูกผูกไว้กับฐานบางอย่าง นิวคลีโอไทด์ระหว่างที่เอ็นไซม์ตัดคือระหว่างที่โปรโมตไฮโดรไลซิสอยู่ภายในลำดับการรับรู้เฉพาะที่เหมือนกันเหล่านี้ (ดูภาพ)

โมเลกุล DNA แต่ละอันสามารถประกอบด้วยลำดับของ GAATTC ซ้ำหลายครั้งตลอดความยาวทั้งหมด ดังนั้นเมื่อสัมผัสกับเอนไซม์ EcoRI สายเกลียวดีเอ็นเอสามารถผ่า "ตัด" ในหลาย ๆ ที่สร้างขนาดที่แตกต่างกันหลายชิ้น

เราจะดูด้านล่างว่าชิ้นดีเอ็นเอที่แยกออกเหล่านี้แตกต่างกันอย่างไร