ข้อมูล

44: ตารางทดสอบทางชีวเคมี - ชีววิทยา

44: ตารางทดสอบทางชีวเคมี - ชีววิทยา


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

44: ตารางทดสอบทางชีวเคมี

การทดสอบทางชีวเคมีและการระบุ Proteus mirabilis

การทดสอบทางชีวเคมีและการระบุ Proteus vulgaris คืออะไร?

อันดับแรกและสำคัญที่สุดการระบุการทดสอบ proteus spp โดยการทดสอบ urease มากที่สุด,PPA
การทดสอบทางชีวเคมี socond อินโดล มีค่าเสื่อมเป็น p Mirabilis จาก p vulgaris ถ้าอินโดล positve_ P.vllulgaris ถ้าลบ – P.mirabilis

ฉันขอทราบผลการทดสอบ coagulase ได้หรือไม่?

อะไรคือการระบุที่ดีที่สุดของคอรีนีแบคทีเรียมคอตีบ

ความลาดเอียงในซีรั่มของ Loefler หรือวุ้น Tindales เป็นสื่อที่เลือกสรรสำหรับ cornye Cornye มีลักษณะเฉพาะบนวุ้น Tinsdale จากนั้นคุณจะต้องทำคราบกรัมตามปกติ (แบคทีเรียแกรมบวกซึ่งบางครั้งก็มีรูปร่างเหมือนไม้กอล์ฟ) คาตาเลส (บวก) การทดสอบยูรีเอส (เชิงลบ) วุ้น MacConkey ไม่รองรับการเจริญเติบโต อัลเบิร์ตย้อมเพื่อยืนยันที่จะแสดงหางสีเขียวและเม็ดเมตาโครมาติกสีแดง การทดสอบการหมักคาร์โบไฮเดรต: มอลโตส- เชิงลบ, เดกซ์โทรส-บวก, แป้ง- บวก, ซูโครส- เชิงลบ ผลบวกของแป้งและผลลัพธ์เชิงลบของซูโครสแสดงให้เห็นการมีอยู่ของสายพันธุ์ Corynebacterium diphtheriae (gravis)

ทางเลือกของสื่อในการปลูก Proteus mirabilis คืออะไร

วุ้นสารอาหารเป็นทางเลือกที่ปลอดภัยเสมอ MacConkey มักจะค่อนข้างดีโดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าคุณต้องการทดสอบสิ่งที่หมักแลคโตส ในที่สุด วุ้นเลือดก็เจ๋งเสมอสำหรับพี่ mirabilis เพราะสิ่งมีชีวิตมีแนวโน้มที่จะจับกลุ่มกันทั่ววุ้น (เพราะมันเคลื่อนที่ได้สูง) ดังนั้นมันจึงดูเย็นตา


ไมโครบอยด์

การแบ่งปันความรู้ช่วยเพิ่มความรู้ ความรู้ควรมาพร้อมกับต้นทุนที่น้อยที่สุด

  • รับลิงค์
  • Facebook
  • ทวิตเตอร์
  • Pinterest
  • อีเมล
  • แอพอื่นๆ

ชุดทดลอง # 15: การทดสอบทางชีวเคมีเพื่อระบุแบคทีเรียที่แยกได้

ในวันก่อนหน้า การทดสอบส่วนใหญ่ทำในปริมาณมาก โดยทั่วไปแล้วจะใช้สื่อมากกว่า 5 มล. ซึ่งต้องใช้เวลานานกว่าเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่มองเห็นได้ ให้เรายกตัวอย่างกรณีของการใช้แลคโตส ถ้าฉันใส่ E coli ลงในสื่อที่ประกอบด้วยแลคโตส 5 มล. มันจะต้องใช้เวลามากขึ้นในการแยกแลคโตสและให้ค่า pH เปลี่ยนแปลงเพียงพอที่จะให้ค่าที่อ่านได้เมื่อเทียบกับการทำแบบเดียวกันใน 0.1 มล. ปานกลาง. วิธีที่ง่ายที่สุดในการลดเวลาในการอ่านเพื่อลดปริมาณปฏิกิริยาทั้งหมด ซึ่งเป็นหนึ่งในแนวคิดหลักในระบบอัตโนมัติส่วนใหญ่ที่ช่วยให้อ่านผลลัพธ์ได้เร็วขึ้น รูปที่ 1 เป็นกราฟสมมุติที่แสดงเวลาที่ต้องใช้เพื่อให้ได้ผลบวกในสภาวะต่างๆ (รายละเอียดที่แน่นอนจะเปลี่ยนแปลงไปตามการทดสอบและเงื่อนไขอื่นๆ)

ตารางที่ 1: รูปแบบภาวะเม็ดเลือดแดงแตกที่
เห็นในวุ้นเลือด
ในสถานการณ์ทั่วไป ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกไม่ถือเป็นการทดสอบทางชีวเคมี และนักจุลชีววิทยาหลายคนปฏิเสธที่จะเรียกการทดสอบนี้ สำหรับกรณีส่วนใหญ่ รูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดงในวุ้นเลือดทำให้การระบุตัวตนแคบลงอย่างมาก มีรูปแบบการแตกของเม็ดเลือดแดง 4 แบบที่สามารถเห็นได้ในวุ้นเลือด

ควรสังเกตว่าภาวะเม็ดเลือดแดงแตกขึ้นอยู่กับเอ็นไซม์ที่เกี่ยวข้องและจะเห็นความผันแปรสำหรับสปีชีส์เดียวกันขึ้นอยู่กับสภาวะ การศึกษาโดย Vancanneyt et al ซึ่งทดสอบหลายสายพันธุ์ของ อี ฟีเซียม พบสิ่งต่อไปนี้ beta-hemolysis พบได้ทั้งในแกะและเลือดมนุษย์เพียง 1 สายพันธุ์ 4 สายพันธุ์แสดง beta-hemolysis ในเลือดของมนุษย์ แต่ไม่พบในเลือดแกะ และสายพันธุ์ที่เหลือไม่พบการแตกของเม็ดเลือดแดงในอาหารทั้งสองชนิด แน่นอน ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในเบต้าไม่ใช่ลักษณะทั่วไปสำหรับกลุ่ม Enterococcus

ภาพที่ 1: จานวุ้นเลือด. แหล่งที่มา
สำหรับการเตรียมวุ้นเลือด เลือดแกะเป็นตัวทำปฏิกิริยาที่แนะนำ โดยทั่วไปแล้ว เลือดแกะที่ได้รับจะถูกกระตุ้นด้วยเครื่องกระตุกหัวใจ (โดยใช้ลูกปัดแก้วปลอดเชื้อ) และเติมลงในอาหารหลักเพื่อให้ได้วุ้นเลือด จากประสบการณ์ของผม การล้างตัวอย่างเลือดด้วยน้ำเกลือปกติและการใช้ RBC ของแกะที่ล้างภายหลังให้ผลลัพธ์ที่ดีขึ้นเล็กน้อย ห้องปฏิบัติการบางแห่งยังใช้เลือดม้า/วัวโดยไม่ทำให้เกิดความคลาดเคลื่อนอย่างมีนัยสำคัญในผลลัพธ์
รูปที่ 1: กิจกรรม SOD และ Catalase
จาก Prescott Textbook 5th Ed
ขอพูดนอกเรื่องนิดนึงนะครับ เผื่อจะเป็นประโยชน์ โดยทั่วไป แอโรบิกบังคับและแอโรบิกแบบไม่ใช้ออกซิเจนแบบปัญญามักประกอบด้วยเอนไซม์ซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD) และคาตาเลสซึ่งกระตุ้นการทำลายของอนุมูลซูเปอร์ออกไซด์และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ตามลำดับ แอนแอโรบิกที่เข้มงวดส่วนใหญ่ไม่มีเอ็นไซม์ทั้งสองหรือมีความเข้มข้นต่ำมาก ดังนั้นจึงไม่สามารถทนต่อ O . ได้ 2 มีข้อยกเว้นหลายประการสำหรับกฎเหล่านี้ เปอร์ออกซิเดสยังสามารถใช้เพื่อทำลายไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ รูปที่ 2 เป็นภาพประกอบของการเติบโตของแบคทีเรียที่มีการตอบสนองต่อออกซิเจนและคุณสมบัติ catalase และ SOD ที่แตกต่างกัน
  • คาตาเลสเชิงคุณภาพ
  • SQ (กึ่งเชิงปริมาณ) การทดสอบ catalase
  • 68 C (ความร้อนคงตัว) การทดสอบ catalase
รูปภาพ 2: การทดสอบคาตาเลส แหล่งที่มา
รีเอเจนต์ที่ใช้สำหรับการทดสอบคาตาเลสเชิงคุณภาพคือ 3% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ แม้ว่าจะยอมรับได้ถึง 6% การทดสอบสามารถทำได้โดยผสมโคโลนีกับ H . สองสามหยด 2 โอ 2 ในแบบสไลด์ (Slide method) เติมโคโลนีเล็กๆ ลงในหลอดทดลองที่มี H 2 โอ 2 (วิธีหลอด) หรือเติม H 2 โอ 2 ไปที่จานเพาะเชื้อ/ เอียงโดยตรง (วิธีตรง) และมองหาการก่อตัวของฟองอากาศภายใน 10 วินาที ควรใช้ความระมัดระวังว่าอาหารเลี้ยงเชื้อที่ใช้โคโลนีไม่มี RBCs และควรใช้วัสดุเฉื่อย (เช่นแท่งพลาสติก ลวดนิกโครม ฯลฯ) สำหรับผสมโคโลนีกับรีเอเจนต์
ภาพที่ 3: การทดสอบออกซิเดส แหล่งที่มา
การทดสอบระบุว่ามี cytochrome c oxidase หรือ indophenol oxidase การทดสอบเป็นไปตามหลักการของปฏิกิริยารีดอกซ์ (รีดักชั่น-ออกซิเดชัน) ปฏิกิริยารีดอกซ์พูดง่ายๆ คือ ชุดของปฏิกิริยาที่เกี่ยวข้องกับการถ่ายโอนอิเล็กตรอน มันเป็นปฏิกิริยาสององค์ประกอบที่เกี่ยวข้องกับการเกิดออกซิเดชันซึ่งเป็นการสูญเสียอิเล็กตรอนและการลดลงซึ่งเป็นการเพิ่มของอิเล็กตรอน การทดสอบออกซิเดสมักใช้รีเอเจนต์ tetra-methyl-p-phenylenediamine dihydrochloride เป็นตัวให้อิเล็กตรอนเทียม เมื่อรีเอเจนต์ถูกออกซิไดซ์จะเปลี่ยนจากสารประกอบที่ไม่มีสีเป็นสารประกอบสีน้ำเงินเข้มหรือสีม่วง อินโดฟีนอลสีน้ำเงิน

ตามหลักการแล้ว เตตระ-เมทิล-พี-ฟีนิลีนไดเอมีน ไดไฮโดรคลอไรด์ 1% ถูกเตรียมสดใหม่ทุกวันและชุบลงในกระดาษกรองแล้วตากให้แห้ง อาณานิคมถูกป้ายบนกระดาษและมองหาการเปลี่ยนสีภายใน 10 วินาที ขณะนี้มีแผ่นดิสก์ที่มีจำหน่ายทั่วไปซึ่งประกอบด้วย N, N-dimethyl-p-phenylenediamine oxalate, ascorbic acid และ α-naphthol ซึ่งเป็นส่วนผสมที่เสถียรกว่าจึงหลีกเลี่ยงข้อกำหนดในการเตรียมรายวัน

การทดสอบ Modified oxidase เป็นการทดสอบพิเศษที่ใช้สำหรับ cocci บวกของ Gram positive และ catalase positive เท่านั้น โดยทั่วไปเรียกว่าการทดสอบ Microdase เอนไซม์ Micrococcus oxidase ไม่สามารถเข้าถึงได้ง่ายสำหรับปฏิกิริยา ปัญหานี้แก้ไขได้ด้วยการใช้ DMSO ซึ่งซึมผ่านเซลล์และอนุญาตให้เข้าถึงตัวทำปฏิกิริยากับเอนไซม์ออกซิเดส


การใช้ Ureas Test

  1. การทดสอบนี้ใช้เพื่อแยกความแตกต่างของสิ่งมีชีวิตโดยพิจารณาจากความสามารถในการไฮโดรไลซ์ยูเรียด้วยเอนไซม์ยูเรีย
  2. การทดสอบนี้สามารถใช้เป็นส่วนหนึ่งของการระบุ Enterobacteriaceae หลายสกุลและหลายสายพันธุ์ ได้แก่ Proteus, Klebsiellaและบางส่วน เยร์ซิเนีย และ ซิโตรแบคเตอร์ บางชนิดเช่นกัน Corynebacterium สายพันธุ์.
  3. นอกจากนี้ยังเป็นประโยชน์ในการระบุ คริปโตค็อกคัส เอสพีพี, บรูเซลล่า, เชื้อเฮลิโคแบคเตอร์ ไพโลไรและแบคทีเรียอื่นๆ อีกมากมายที่ผลิตเอนไซม์ยูเรีย
  4. การทดสอบนี้ดำเนินการกับตัวอย่างชิ้นเนื้อในกระเพาะอาหารโดยตรงเพื่อตรวจหาการมีอยู่ของ H. pylori.

ผลกระทบของเมธามิโดฟอสต่อลักษณะทางชีวเคมี แคแทบอลิซึม และพันธุกรรมของชุมชนจุลินทรีย์ในดิน

เมทามิโดฟอสเป็นสารกำจัดศัตรูพืชออร์กาโนฟอสเฟตที่มีความเป็นพิษสูงและอาจส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อจุลินทรีย์ในดิน อย่างไรก็ตาม ขนาดของผลกระทบนี้ไม่ชัดเจน เราตรวจสอบผลกระทบของเมทามิโดฟอสที่ป้อนเข้าต่ำและสูงต่อโครงสร้างของชุมชนจุลินทรีย์ในดิน และกิจกรรม catabolic และความหลากหลายทางพันธุกรรมของชุมชนแบคทีเรียโดยใช้วิธีการโพลีฟาซิกของชีวมวลของจุลินทรีย์ กรดไขมันฟอสโฟลิปิด (PLFAs) ระดับชุมชน โปรไฟล์ catabolic (CLCPs) และรูปแบบการวิเคราะห์ข้อจำกัด ribosomal DNA (ARDRA) แบบขยาย ผลลัพธ์ของเราระบุว่าปัจจัยการผลิตเมทามิโดฟอสที่สูงช่วยลดปริมาณคาร์บอนชีวมวลรวมของจุลินทรีย์ (C .) ลงอย่างมีนัยสำคัญไมค์) และชีวมวลของเชื้อรา แต่เพิ่มแบคทีเรียแกรมลบโดยไม่มีผลกระทบต่อแบคทีเรียแกรมบวกอย่างมีนัยสำคัญ สิ่งที่น่าสนใจคือ รูปแบบ CLCPs แสดงให้เห็นว่าปัจจัยการผลิตเมทามิโดฟอสสูงยังช่วยปรับปรุงกิจกรรมแคแทบอลิซึมของแบคทีเรียแกรมลบได้อย่างมีนัยสำคัญ รูปแบบ ARDRA แสดงให้เห็นว่าความหลากหลายทางพันธุกรรมของชุมชนแบคทีเรียลดลงภายใต้ความเครียดจากสารเคมี นอกจากนี้ การเปลี่ยนแปลงในพารามิเตอร์ของจุลินทรีย์ที่ตรวจสอบมีนัยสำคัญน้อยกว่าภายใต้ปัจจัยการผลิตที่ต่ำเมื่อเทียบกับปัจจัยการผลิตที่สูงของเมธามิโดฟอส ซึ่งบ่งชี้ถึงผลกระทบของปริมาณยาเมธามิโดฟอสต่อชุมชนจุลินทรีย์ ผลลัพธ์ของเราเป็นหลักฐานแรกที่แสดงว่าเมธามิโดฟอสส่งผลต่อส่วนประกอบของจุลินทรีย์ในดินผ่านการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อรา แต่เพิ่มกิจกรรมชีวมวลและแคแทบอลิซึมของแบคทีเรียแกรมลบ


ซูโครส ไฮโดรไลซิส โดย ซูคราส

ในห้องปฏิบัติการนี้ คุณจะสาธิตการผลิตเอนไซม์ ซูเครส (อินเวอร์เทส) โดยยีสต์ เอนไซม์ซูเครสเร่งปฏิกิริยา ไฮโดรไลซิส ของไดแซ็กคาไรด์ซูโครสเพื่อสลับน้ำตาล น้ำตาลกลับเป็นส่วนผสมของ กลูโคสและฟรุกโตสซึ่งเป็นทั้ง โมโนแซ็กคาไรด์. ยีสต์ไม่สามารถเผาผลาญ (หมัก) ซูโครสได้โดยตรง สำหรับยีสต์ที่จะใช้ซูโครสเป็นแหล่งพลังงาน ขั้นแรกจะต้องแปลงเป็นกลูโคสและฟรุกโตสโมโนแซ็กคาไรด์ที่หมักได้
วิธีแก้ปัญหาของเบเนดิกต์&# เป็นน้ำยาทดสอบที่ทำปฏิกิริยาในเชิงบวกกับน้ำตาลรีดิวซ์อย่างง่าย โมโนแซ็กคาไรด์ทั้งหมดและไดแซ็กคาไรด์ส่วนใหญ่เป็น ลดน้ำตาลมีหมู่คาร์บอนิลอิสระ (=C=O) ซูโครสเป็นข้อยกเว้นที่ไม่ใช่น้ำตาลรีดิวซ์ การทดสอบของเบเนดิกต์ที่เป็นบวกนั้นสังเกตได้จากการก่อตัวของตะกอนคิวพอรัสออกไซด์สีน้ำตาลแดง การทดสอบในเชิงบวกที่อ่อนแอกว่าจะเป็นสีเหลืองถึงสีส้ม ทั้งกลูโคสและฟรุกโตสทดสอบบวกด้วยสารละลายเบเนดิกต์ ซูโครสไม่ได้ผล

* สารละลายกรองยีสต์
ยีสต์แห้งที่ใช้งานในแพคเกจ 7 กรัมต่อน้ำกลั่น 80 มล
ขาตั้งแหวนและแหวนสำหรับยึดกรวย
ช่องทางการกรอง
กระดาษกรอง (ความเร็วสูง)
**สารละลายซูโครส 5%
ซูโครส 5 กรัมต่อน้ำกลั่น 95 มล.
***สารละลายน้ำตาลกลูโคส 5% (เดกซ์โทรส)
เดกซ์โทรส 5 กรัมต่อน้ำกลั่น 95 มล.
Benedict’s การแก้ปัญหาเชิงคุณภาพ
น้ำกลั่น
กระบอกสูบไล่ระดับ 10 มล. จำนวน 5 กระบอก (หนึ่งอันสำหรับแต่ละสารละลาย)
7 หลอดทดลอง 18 x 150 mm
ที่วางหลอดทดลอง
ชั้นวางหลอดทดลอง
2 บีกเกอร์ 400 มล.
จานร้อน

* ในการเตรียมสารละลายกรองยีสต์ ให้ผสมยีสต์แห้ง 1 ชุดกับ 80 มล ของน้ำกลั่น ให้ยืนสำหรับ 20 นาทีกวนเป็นครั้งคราว. กรองสารแขวนลอยที่เกิดขึ้นและบันทึกสารละลายกรอง นี่คือสารสกัดอินเวอร์เทสของคุณ แช่เย็นสารสกัดถ้าค้างคืน เพียงพอสำหรับ 8 ห้องปฏิบัติการ

**เตรียมสารละลายซูโครส 5% ให้ละลาย 5 กรัม ของซูโครสใน 95 มล ของน้ำกลั่น ควรเตรียมก่อนใช้งานไม่นาน เพียงพอสำหรับ 4 ห้องปฏิบัติการ

***เตรียมสารละลายน้ำตาลกลูโคส 5% ให้ละลาย 5 กรัม ของเดกซ์โทรส (นี่คือชื่อที่ใช้เมื่อแห้ง) ใน 95 มล ของน้ำกลั่น ควรเตรียมก่อนใช้งานไม่นาน เพียงพอสำหรับห้องปฏิบัติการ 9 แห่ง

1. ฉลาก 3 หลอดทดลอง A1, A2, และ A3และวางลงในชั้นวางหลอดทดลอง ใส่ลงในหลอดทดลองดังนี้

เข้าไปในหลอด A2, สถานที่ 10 มล ของสารละลายซูโครส 5% และ 4 มล ของสารสกัดอินเวอร์เทส

เข้าไปในหลอด A3, สถานที่ 10 มล น้ำกลั่นและ 4 มล ของสารสกัดอินเวอร์เทส

2. ใส่ประมาณ 250 มล. น้ำ 30 ถึง 35 oC ลงในบีกเกอร์ขนาด 400 มล. ฟักไข่สามหลอดในอ่างน้ำอุ่นนี้เพื่อ 35 นาที.

3. ฉลาก 4 หลอดทดลอง B1, B2, B3 และ B4และวางลงในชั้นวางหลอดทดลอง สถานที่ 5 มล ของสารละลายเชิงคุณภาพของเบเนดิกต์ลงในหลอดแต่ละหลอด ตอนนี้โอนไปที่ NS หลอดดังต่อไปนี้:

เข้าไปในหลอด B2, ถ่ายโอนเนื้อหาของ tube A2.

เข้าไปในหลอด B3, ถ่ายโอนเนื้อหาของ tube A3.

เข้าไปในหลอด B4, สถานที่ 10 มล ของสารละลายน้ำตาลกลูโคส 5%

4. วางท่อ B1, B2, B3, และ B4 ลงในอ่างน้ำเดือด คำเตือน: อย่าปล่อยให้อาบน้ำเดือดแรง เก็บไว้ที่จุดเดือด หลังจากผ่านไป 3 หรือ 4 นาที ให้ถอดหลอดออกและสังเกตว่ามีการเปลี่ยนแปลงอย่างไร


การระบุการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย: 3 สื่อ

1. สังเกตและบันทึกสัณฐานวิทยาของการผลิตอาณานิคมและเม็ดสีในจานหรือหลอดอาหารวุ้น การระบุแบคทีเรียด้วย morpho­logy ของอาณานิคมเท่านั้นอาจไม่เพียงพอ ดังนั้นจึงต้องดำเนินการทดสอบแบตเตอรี่อื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง

อย่างไรก็ตาม การผลิตเม็ดสี หากมี อาจให้เบาะแสบางอย่าง โดยทั่วไปจะมีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียด้วยเม็ดสีเขียวบนวุ้นสารอาหาร รงควัตถุสามารถกระจายตัวได้ในตัวกลางในกรณีของ Pseudomonas ที่เป็นเม็ดสี (รูปที่ 7.2) ในขณะที่ Staphylococcal pig­ment ยังคงมีการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นภายในอาณานิคมของแบคทีเรีย (รูปที่ 7.1) เช่น เม็ดสีเหลืองทองใน Staph, aureus และเม็ดสีขาวใน Staph, epidermidis

ในตัวกลางที่เป็นของเหลว เช่น น้ำเปปโตน อาจมีเม็ดสีเขียวปนอยู่ด้วยการก่อตัวของเกล็ดบนพื้นผิว พื้นผิว pellicle (เช่น ในกรณีของ vibrio และ Bacillus) บ่งบอกถึงลักษณะแอโรบิกที่แข็งแกร่งของแบคทีเรีย เนื่องจากมีออกซิเจนมากขึ้นใกล้พื้นผิว

2. ตรวจสอบรอยเปื้อนของแกรมและการเตรียมหยด

(b) cocci แกรมบวกในกลุ่ม (Staphylococci)

(c) แท่งแกรมบวกที่มีหรือไม่มีสปอร์

การค้นพบนี้ได้รับการบันทึกและปฏิบัติตามตารางที่ 7.3, B, C, G & H เพื่อให้ได้ข้อมูลประจำตัว

การเจริญเติบโตบนสื่อพิเศษอื่น ๆ (Selective/Inhibitory/Indicator):

การเจริญเติบโตใดๆ บนตัวกลางคัดเลือก/ตัวบ่งชี้/ตัวยับยั้งพิเศษ จะต้องระบุโดยทำตามขั้นตอนต่อไปนี้:

1. ระบุสื่อและคิดว่าแบคทีเรียที่เติบโตบนนั้น

2. สังเกตลักษณะอาณานิคมและตัวบ่งชี้การเจริญเติบโตของสกุลพิเศษใด ๆ เช่น ซูโครสหมักอาณานิคมสีเหลืองแบนบน T.C.B.S. agar บ่งบอกถึงการเจริญเติบโตของ vibrio

3. ทำการศึกษาสัณฐานวิทยาด้วยแกรมสเตนหรือคราบพิเศษใดๆ (เช่น การย้อมสีแคปซูล การย้อมสปอร์ การย้อมสีเวย์สันสำหรับ Y. เพสทิส เป็นต้น)

6. ไปทดสอบทางชีวเคมี

7. การทดสอบการผลิตเอนไซม์และสารพิษ

8. การตรวจหาแอนติเจนโดยการเกาะติดกันด้วยสไลด์หรือการบวมของแคปซูลโดยใช้ไฮไทร์ซีรั่ม (HTS) ที่เฉพาะเจาะจง

NS. Pseudomonas Aeruginosa:

สิ่งมีชีวิตเหล่านี้ผลิตหนองสีน้ำเงินและ pyocyanea หมายถึง “blue pus” อย่างแท้จริง ป.ล. aeruginosa เป็นสาเหตุสำคัญของการติดเชื้อในโรงพยาบาล การติดเชื้อส่วนใหญ่เกิดขึ้นในผู้ป่วยที่มีโรคพื้นฐานที่ร้ายแรง เช่น แผลไฟไหม้และเนื้อร้าย หรือเป็นผลมาจากขั้นตอนการรักษา (การใส่สายสวน การตรวจซิสโตสโคป) การรักษาด้วยยาต้านจุลชีพก่อนหน้านี้สนับสนุนการติดเชื้อหลอกและไชโมนัส

1. การติดเชื้อที่ผิวหนังโดยเฉพาะในบาดแผล แผลกดทับ และแผลไฟไหม้

2. การติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ มักเกิดขึ้นภายหลังการใส่สายสวนและขี้อาย หรือในการติดเชื้อเรื้อรัง

3. การติดเชื้อในระบบทางเดินหายใจ โดยเฉพาะในภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องและขี้อาย และโรคซิสติกไฟโบรซิส

4. การติดเชื้อที่หูเช่น หูชั้นกลางอักเสบเรื้อรังและหูชั้นกลางอักเสบจากภายนอก

5. การติดเชื้อที่ตามักจะได้รับในโรงพยาบาล

6. ภาวะโลหิตเป็นพิษอาจเกิดขึ้นในทารกแรกเกิดและผู้สูงอายุที่อ่อนแอ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้ป่วยที่ได้รับยาที่เป็นพิษต่อเซลล์หรือการฉายรังสี

7. หลอดเลือดอักเสบชนิดเนื้อตายเฉียบพลันซึ่งนำไปสู่ภาวะเลือดออกในผิวหนัง (ecthymagangrenosa) และอวัยวะภายใน (ตับและไต)

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

หนอง พันแผล ปัสสาวะเฉพาะช่วงกลางน้ำ น้ำมูกไหล เสมหะ หรือเลือด

บนวุ้น MacConkey ของ MacConkey จะมีลักษณะเป็นอาณานิคมสีซีดและแบนและมีเส้นขอบที่แผ่ออกไป ในวุ้นสารอาหารหรือวุ้น Mueller-Hinton มีเม็ดสีฟ้า เขียวหรือน้ำตาลแดงกระจาย และมีกลิ่นคล้ายองุ่นหรือขี้อายหรือคล้ายผลไม้ สื่อการคัดเลือก เช่น วุ้นเซทริไมด์มีประโยชน์ในการแยกสิ่งมีชีวิตออกจากอุจจาระหรือตัวอย่างอื่นๆ ที่ปนเปื้อนด้วยพืชผสม

การระบุตัวตนขึ้นอยู่กับ:

1. ลักษณะสัณฐานวิทยาอาณานิคมและลักษณะแกรมฟิล์ม

2. กลิ่นคล้ายองุ่นหรือกลิ่นผลไม้ของอาณานิคม

3. สายพันธุ์ของ Mucoid colony มีลักษณะเฉพาะก่อนวัยอันควรในตัวอย่างทางเดินหายใจ

4. ในทางชีวเคมี P. aeruginosa ถูกระบุอย่างมั่นใจตามคุณสมบัติต่อไปนี้:

(a) การทดสอบออกซิเดสที่เป็นบวก (ตารางที่ 7.10)

(b) Triple sugar iron (TSI) ปฏิกิริยาวุ้นของอัลคาไลน์ที่ไม่มีการเปลี่ยนแปลง

(c) สารสีกระจายแสงสีเขียวสดใสบน Mueller-Hinton หรือวุ้นอื่น ๆ ที่ไม่มีสีย้อม (เช่น N. agar)

P. aeruginosa สายพันธุ์เป็นครั้งคราวผลิตเฉพาะ pyoverdin ซึ่งจะไม่แยกความแตกต่างจาก P. fluorescens หรือ P. putida สปีชีส์หลังนี้ไม่สามารถเติบโตที่อุณหภูมิ 42°C ในขณะที่ P. aeruginosa เติบโตที่ 42°C

NS. Staphylococcus (S.aureus):

S. aureus เป็นสิ่งมีชีวิตที่ก่อให้เกิดโรค pyogenic ที่สำคัญ และกล่องที่ 1 แสดงโรคที่สำคัญที่เกิดจากสิ่งเดียวกัน

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

หนองจากแผลหนอง น้ำไขสันหลังอักเสบจากเยื่อหุ้มสมองอักเสบ เลือดจากภาวะโลหิตเป็นพิษ เสมหะจากการติดเชื้อทางเดินหายใจ และอาหารที่น่าสงสัย อาเจียนหรืออุจจาระจากอาหารเป็นพิษ

การตรวจรอยเปื้อนแกรมของหนองและตัวอย่างอื่นๆ แสดงให้เห็น cocci แกรมบวกในกลุ่มที่มี cocci เดี่ยวและคู่บางส่วน

(a) ตัวอย่างได้รับการฉีดวัคซีนในวุ้นเลือดหรืออาหารเลี้ยงเชื้อแบบคัดเลือกที่มีโซเดียมคลอไรด์ 7% ซึ่งยับยั้งการเจริญเติบโตของอวัยวะส่วนใหญ่อื่นที่ไม่ใช่ Staphylococci

(b) วุ้นเกลือ Mannitol เป็นสื่อที่เลือกสรรและแตกต่างสำหรับ Staphylococci แมนนิทอลถูกหมักโดยเชื้อ S. aureus แต่ไม่ใช่เชื้อ Staphylococci ส่วนใหญ่

(a) การทดสอบ Coagulase: S. aureus เป็น coagulase positive

(b) การทดสอบความไวต่อยาปฏิชีวนะ โปรไฟล์ทางชีวเคมี (การพิมพ์ทางชีวภาพ) การพิมพ์ฟาจ การวิเคราะห์กรดนิวคลีอิกอาจทำได้เพื่อระบุและจำแนกสิ่งมีชีวิตเพื่อการศึกษาทางระบาดวิทยาเพื่อติดตามแหล่งที่มาของการติดเชื้อสแตฟฟิโลคอคคัส

ค. บาซิลลัส:

สมาชิกของสกุลบาซิลลัสเป็นแบคทีเรียแอโรบิก สปอร์ แบริ่งแกรมบวก จัดเป็นลูกโซ่ สปอร์มีลักษณะหดกลับ วงรีและอยู่ตรงกลาง และมีเส้นผ่านศูนย์กลางเท่ากับความกว้างของแบคทีเรีย

บาซิลลัส แอนทราซิส:

(ก) B. anthracis - สาเหตุของโรคแอนแทรกซ์

(b) B. cereus — ทำให้เกิดอาหารเป็นพิษ

ครั้งที่สอง ไม่ก่อให้เกิดโรค (saprophytes):

(1) เซลล์ขนาดใหญ่: B. megaterium, B. cereus

(2) เซลล์เล็ก: B. subtilis, B. stearothermophilus

แอนแทรกซ์เป็นโรคจากสัตว์สู่คน มนุษย์บางครั้งติดเชื้อจากสัตว์หรือผลิตภัณฑ์จากสัตว์เป็นลำดับที่สอง

โรคแอนแทรกซ์เป็น 4 ประเภททางคลินิก:

สปอร์เข้าสู่ผิวหนังได้บ่อยที่สุดผ่านทางผิวหนัง เปลือกโลก หรือรูขุมขนที่มีรอยถลอก และมักจะสร้างตุ่มพุพองที่ไม่เจ็บปวดเพียงครั้งเดียว มักเรียกว่า ‘ตุ่มหนองร้ายแรง’

การกินเนื้อสัตว์ที่ปนเปื้อนส่งผลให้เกิดโรคกระเพาะและลำไส้อักเสบรูปแบบรุนแรงและมักเป็นอันตรายถึงชีวิต ซึ่งพบได้น้อยกว่ารูปแบบทางผิวหนังมาก

มักเรียกกันว่า ‘wool-sorter’s disease’ และเกิดจากการสูดดมสปอร์จำนวนมากและมักจะถึงแก่ชีวิต เป็นโรคแอนแทรกซ์ที่พบได้ยากในประเทศกำลังพัฒนา

(4) โรคแอนแทรกซ์โรคโลหิตจาง:

โรคแอนแทรกซ์ในลำไส้และปอดที่ผิวหนังหากไม่ได้รับการรักษาทันเวลา ความก้าวหน้าในภาวะโลหิตเป็นพิษและการเสียชีวิตเกิดขึ้นจากการติดเชื้ออย่างท่วมท้น

ตัวอย่าง: หนอง ของเหลว เสมหะหรือเลือด ขึ้นอยู่กับชนิดของแผล ตัวอย่างต้องมีป้ายกำกับว่า “ความเสี่ยงสูง”

B. anthracis เป็นแบบแคปซูล ไม่เคลื่อนที่ ขนาดใหญ่ (5-8/1.5 µm) แท่งแกรมบวกที่มีปลายเป็นเหลี่ยม รูปแบบสปอร์ไม่เคยเกิดขึ้นในเนื้อเยื่อ แต่จะพัฒนาหลังจากที่ร่างกายหลั่งหรือหากเติบโตบนสื่อประดิษฐ์ สปอร์สามารถย้อมด้วยวิธีดัดแปลงของ Ziehl- Neelsen’s แคปซูลถูกสร้างขึ้นในเนื้อเยื่อ แต่มักจะขาดการเพาะเลี้ยง

เมื่อ B. anthracis ในเลือดของสัตว์ในฟิล์มคงความร้อนถูกย้อมด้วยโพลิโครมเมทิลีนบลูเป็นเวลา 10-20 วินาที วัสดุแคปซูลที่แตกสลายจะปรากฏเป็นสีอสัณฐานและเป็นสีม่วงรอบๆ แบคทีเรีย

B. anthracis เป็นสัตว์ที่มีอากาศถ่ายเทและไม่ใช้ออกซิเจนแบบปัญญา เติบโตได้ง่ายบนสื่อทั่วไปในช่วงอุณหภูมิกว้าง (25°-30°C) ที่เหมาะสมที่สุด 35°C โคโลนีมีเส้นผ่านศูนย์กลาง 2-5 มม. หนาแน่น สีขาวอมเทา ประกอบด้วยเซลล์ที่ขนานกันทำให้เกิดขอบหยักของโคโลนี ลักษณะที่เรียกว่า ‘หัวเมดูซ่า’ หรือ ‘ล็อคผมที่ม้วนงอ’

โคโลนีไม่ใช่เม็ดเลือดหรือสร้างเม็ดเลือดเพียงเล็กน้อยเท่านั้น

การเจริญเติบโตมักจะไม่ขุ่น แต่จะเกิดเป็นเม็ดหนาบนพื้นผิว

3. วัฒนธรรมแทงเจลาติน:

การเจริญเติบโตเกิดขึ้นตามทางเดินของลวดหนามที่มีหนามแหลมด้านข้าง กว้างที่สุดใกล้พื้นผิว — “ ต้นสนกลับด้าน” ปรากฏขึ้น&ขี้อาย แต่การทำให้เป็นของเหลวช้า

เมื่อหนูขาวหรือหนูตะเภาถูกเพาะเลี้ยงในช่องท้องด้วยสารหลั่งหรือวัฒนธรรมจำนวนเล็กน้อย สัตว์จะตายใน 36-48 ชั่วโมง เลือดของหัวใจและเสมหะแสดง B. anthracis

บาซิลลัส ซับทิลิส:

เป็นซาโพรไฟต์ที่ไม่ก่อให้เกิดโรคและปรากฏว่าเป็นสารปนเปื้อนทั่วไปของตัวอย่างและสื่อในห้องปฏิบัติการ

วุ้นสารอาหารแสดงว่าแห้ง โคโลนีทึบแสงสีเทาและขาวขี้อาย 2-3 มม. ในน้ำซุปธาตุอาหารมีความขุ่นสม่ำเสมอ

แบคทีเรียแกรมบวกที่มีสปอร์ขั้วย่อย

ไม่ก่อให้เกิดโรคต่อสัตว์ทดลอง พวกมันยังแตกต่างจาก B. anthracis ในการผลิต β-lactamase ซึ่งแตกต่างจากที่ผลิตโดย Staphylococci และเคลื่อนที่ได้

ปานกลาง # 2 วุ้นเลือด:

NS. สเตรปโทคอกคัส:

Streptococcus เป็น coccus แกรมบวกจัดอยู่ในสายโซ่

A. การจำแนก Haemolytic:

การจำแนกประเภทเบื้องต้น&การทำให้หดเกร็งของสเตรปโทคอกคัสขึ้นอยู่กับชนิดของการสลายของเม็ดเลือดที่เกิดขึ้นบนเพลตวุ้นเลือด

(i) β-haemolytic streptococci:

พวกมันสร้างโซนที่ชัดเจนกว้าง (กว้าง (2-4 มม.) ของการแตกของเม็ดเลือดที่สมบูรณ์รอบ ๆ อาณานิคม (รูปที่ 7.8)

(ii) α-haemolytic streptococci:

ทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกบางส่วน (กว้าง 1-2 มม.) โดยมีการเปลี่ยนสีเป็นสีเขียว RBCs ที่ไม่ผ่านการฟอกสีบางชนิดสามารถตรวจพบได้ในเขตเม็ดเลือดแดงแตก ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกอัลฟ่าพบได้ในโรคปอดบวมและไวริแดน สเตรปโตคอคคัส

(iii) γ-haemolytic streptococci:

พวกมันไม่สร้างเม็ดเลือดและ Streptococcus faecalis เป็นสมาชิกทั่วไป

B. การจำแนกเซรุ่มวิทยา (การจัดประเภท Lancefield และ Griffith):

β-haemolytic strepto­cocci ถูกจำแนกโดย Lancefield (1933) ในทางเซรุ่มวิทยาเป็นกลุ่มกว้างๆ ตามพื้นฐานของแอนติเจนเฉพาะกลุ่มของโพลีแซคคาไรด์ของผนังเซลล์ จนถึงปัจจุบัน มีการระบุกลุ่มแลนซ์ฟิลด์ 20 กลุ่ม โดยระบุหมายเลข A-V (ไม่มี I และ J) โดยปฏิกิริยาตกตะกอนกับซีรั่มที่เหมาะสม เชื้อโรคในมนุษย์ส่วนใหญ่อยู่ในกลุ่ม A ซึ่งเรียกอีกอย่างว่า Streptococcus pyogenes

สายพันธุ์ของ Streptococci กลุ่ม A ถูกแบ่งย่อยเพิ่มเติมตามประเภท antisera จำเพาะออกเป็น 80 ซีโรไทป์ของ Griffith (ชนิดที่ 1, ชนิดที่ 2 เป็นต้น) ตามโปรตีนที่ผิวของพวกมัน (M, T และ R) โปรตีน M เป็นแอนติเจนจำเพาะชนิดที่สำคัญที่สุดซึ่งมีอยู่ในรูปแบบแอนติเจนประมาณ 80 รูปแบบ ซึ่งแต่ละชนิดมีอยู่ในซีโรไทป์ที่แตกต่างกันของ S. pyogenes

Streptococcus pyogenes:

กล่องที่ 2 แสดงรอยโรคที่สำคัญที่เกิดจากสเตรปโทคอกคัสสายพันธุ์ต่างๆ

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

ก. การติดเชื้อหนองในเฉียบพลัน:

เก็บตัวอย่างจากบริเวณที่เกิดแผล เช่น ไม้กวาด หนอง หรือเลือด ขึ้นอยู่กับลักษณะของการติดเชื้อ เช่น ไม้พันที่นำมาจากลำคอ ช่องคลอด หรือรอยโรคของผู้ป่วย และจากลำคอและจมูกของผู้ต้องสงสัยเป็นพาหะ

ด้วยกล้องจุลทรรศน์ของรอยเปื้อนของหนองที่แสดง cocci ทรงกลมหรือรูปไข่แกรมบวกในสายโซ่หรือคู่ร่วมกับเซลล์หนองบ่งชี้ว่ามีสเตรปโทคอกคัส (รูปที่ 7.7) สิ่งมีชีวิตที่ไม่มีชีวิตเป็นตัวแปรแกรม

ตัวอย่างควรได้รับการฉีดวัคซีนทันทีหรือส่งไปยังห้องปฏิบัติการในสื่อสำหรับการขนส่งของ Pike's (วุ้นเลือดที่มีคริสตัลไวโอเล็ต 1 ใน 1,000,000 และโซเดียมเอไซด์ 1 ใน 16,000) ตัวอย่างถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้นเลือดและฟักที่อุณหภูมิ 37°C ในชั่วข้ามคืน กระบวนการสลายเม็ดเลือดจะพัฒนาได้ดีกว่าภายใต้สภาวะไร้อากาศหรือคาร์บอนไดออกไซด์ต่ำกว่า 5-10%

ควรใช้วุ้นเลือดแกะเนื่องจากเลือดมนุษย์อาจมีสารยับยั้ง อาณานิคมของแบคทีเรียมีขนาดเล็ก มักมีลักษณะด้านหรือแห้ง และล้อมรอบด้วย β-haemolysis Haemophilus haemolyticus สร้างอาณานิคมที่คล้ายกับ β-haemolytic streptococci แต่การสลายของเม็ดเลือดแดงของพวกมันถูกยับยั้งโดยเลือดแกะ ดังนั้นการแยกเบื้องต้นควรทำในวุ้นเลือดแกะ

การทดสอบทางซีรั่มสำหรับการกำหนดกลุ่มแลนซ์ฟิลด์และชนิดกริฟฟิธของสเตรปโตคอคซีเม็ดเลือดจะทำเมื่อจำเป็นสำหรับการจำแนกประเภทที่แน่นอนและสำหรับการศึกษาทางระบาดวิทยา

เทคนิคง่ายๆ ในการตรวจหาเชื้อ S. pyogenes (กลุ่ม A) ทำได้โดยการทดสอบจานวุ้นโดยใช้แผ่นกระดาษที่ชุบด้วย Bacitracin S. pyogenes มีความไวต่อแบคทีเรีย bacitracin มากกว่า Streptococci ชนิดอื่น สื่อการคัดเลือก เช่น วุ้นเลือดคริสตัลไวโอเลตที่ยับยั้ง commensals ของลำคอ และอาจอำนวยความสะดวกในการตรวจหา S. pyogenes จำนวนเล็กน้อยในก้าน swabs ที่คอ แต่มักไม่ค่อยใช้ในการเพาะเลี้ยง

3. การทดสอบการตรวจหาแอนติเจน:

ชุดทดสอบเชิงพาณิชย์ของ ELISA และการทดสอบการเกาะติดกันมีวางจำหน่ายแล้วเพื่อสาธิตกลุ่ม A สเตรปโทคอคคัสแอนติเจนจากผ้าพันคอซึ่งมีความไว 75-80%

ชุดทดสอบเชิงพาณิชย์ของการทดสอบที่ใช้โพรบกรดนิวคลีอิกสำหรับการตรวจหาเชื้อสเตรปโทคอกคัสกลุ่ม A โดยตรงในสำลีในลำคอ

แม้ว่าแอนติบอดีต่อสารพิษและเอ็นไซม์ของกลุ่ม A ส่วนใหญ่จะผลิตขึ้น แต่แอนติบอดีเหล่านี้มาช้า ดังนั้นการทดสอบแอนติบอดีจึงไม่เป็นประโยชน์ในการวินิจฉัยการติดเชื้อเฉียบพลัน มักใช้ในการวินิจฉัยโรคแทรกซ้อนที่ไม่เป็นหนอง

B. ภาวะแทรกซ้อนที่ไม่เป็นหนอง:

การเพาะเชื้อ S. pyogenes ในลำคอหรือพุพอง การทดสอบทางซีรั่มแสดงหลักฐานของการติดเชื้อสเตรปโทคอกคัสล่าสุด การเพิ่มขึ้นของแอนติบอดีต่อกลุ่ม A สเตรปโทคอกคัสแอนติเจนมักจะตรวจพบได้ ASO titre 200 หน่วยขึ้นไปมีความสำคัญในโรคไขข้อ

ระดับ ASO มักพบในระดับสูงในโรคทางเดินหายใจและไข้รูมาติก แต่ในการติดเชื้อที่ผิวหนังสเตรปโทคอกคัสและโรคไตอักเสบเฉียบพลัน ระดับ ASO มีแนวโน้มต่ำ และการทดสอบ DNase-B มีความน่าเชื่อถือมากกว่า ระดับสารเติมเต็ม (C3) จะลดลงในซีรัมในโกลเมอรูโลนหลังสเตรปโทคอกคัสเฉียบพลันและโรคไขข้ออักเสบ

NS. โพรทูส มอร์กาเนลลา โพรวิเดนเซีย:

ลำไส้ของมนุษย์และสัตว์ บางชนิดเป็น saprophytes และพบได้ในดิน น้ำเสีย และน้ำ

P. mirabilis เป็นสิ่งสำคัญที่สุด สายพันธุ์อื่นพบได้ในบางครั้งในรอยโรคของมนุษย์

1. การติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ โดยเฉพาะหลังการใส่สายสวนหรือซีสโตสโคปี

2. Sepsis: การติดเชื้อในช่องท้อง บาดแผล และหูชั้นกลาง สิ่งมีชีวิตเหล่านี้มักเป็นเชื้อก่อโรคระดับต่ำ และมักเป็นผู้รุกรานรองของแผล แผลกดทับ แผลไฟไหม้ และเนื้อเยื่อที่เสียหาย

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

ขึ้นอยู่กับบริเวณที่ติดเชื้อ ได้แก่ ปัสสาวะ หนอง เลือด

เหล่านี้เป็นแบคทีเรีย pleomorphic ที่เคลื่อนที่อย่างแข็งขัน ไม่ใช่แคปซูล เป็นแกรมลบ

โพรทูสสปีชีส์เติบโตได้ดีบนอาหารเลี้ยงชีพ (วุ้นสารอาหาร วุ้นเลือด) โดยมีการเจริญเติบโตเป็นฝูง สิ่งนี้ทำให้การแยกแบคทีเรียชนิดอื่นทำได้ยากในวัฒนธรรมผสม เนื่องจากการรวมกลุ่มจากโพรทูสอาณานิคมเดียวอาจครอบคลุมการเพาะเลี้ยงทั้งจาน

อย่างไรก็ตาม สื่อที่มีเกลือน้ำดี สิ่งปฏิกูล ยับยั้งไม่ให้จับกลุ่มเป็นฝูง วุ้น MacConkey, DCA และ XLD agar การจับกลุ่มยังถูกยับยั้งโดยการเพิ่มความเข้มข้นของวุ้น (2%), คลอรัลไฮเดรต (1:500) และกรดบอริก (1:1000) โดยการผสมผสานในสื่อ

การหมักแบบไม่มีสีและไม่ใช้แลคโตสบนวุ้น Mac&ShyConkey วัฒนธรรมโพรทูสมีกลิ่นเฉพาะตัว (คาว/น้ำเชื้อ)

ในวัฒนธรรมผสม เชื้อโรคสามารถแยกออกจากจานที่ปนเปื้อนโพรทูสได้โดยการเพาะเลี้ยงย่อยในวุ้น MacConkey กลุ่มมอร์กาเนลลาและโพรวิเดนเซียไม่จัดแสดงการรุมฝูง

ตารางที่ 7.9 แสดง cha­racters ทางชีวเคมีที่โดดเด่นของทั้งสามสกุล

1. แลคโตสไม่ได้หมักโดยสามสกุลใด ๆ ดังนั้นโคโลนีจึงซีดใน MacConkey หรือ DCA

2. ผลิตอินโดลทั้งหมด ยกเว้น P. mirabilis และมีเพียงสองสมาชิก (P. mirabilis และ P. vulgaris) ผลิต H2NS.

3. สมาชิกทั้งหมดผลิตฟีนิลอะลานีนดีอะมิเนสและดีอะมิเนตฟีนิลอะลานีนเป็นกรดฟีนิลไพรูวิก (PPA)

4. การผลิตยูเรียและไฮโดรไลซิสของยูเรียเป็นคุณลักษณะอีกอย่างหนึ่งของสมาชิกทั้งหมดในกลุ่ม ยกเว้น P. stuartii ซึ่งเป็นค่าลบของยูเรีย

การแยกความแตกต่างจากโคโลนีสีซีดทั่วไปของเชื้อโรคที่แยกได้บนอาหารที่มีแลคโตสนั้นทำได้โดยการทดสอบกิจกรรมของยูรีเอส Shigella และ Salmonella ไม่ผลิตยูเรีย

แอนติเจนบางชนิด (ส่วนที่เสถียรของอัลคาไล O) ของสายพันธุ์ Proteus (0 x 19, 0 x K และ 0 x 2) เป็นเรื่องปกติของ Rickettsial prowazekii และจับกับซีรั่มจากผู้ป่วยโรค rickettsial การแบ่งปันแอนติเจนนี้เป็นพื้นฐานของปฏิกิริยาไวล์-เฟลิกซ์ (การทดสอบการเกาะติดกันของเฮเทอโรไฟล์)

Citrobacter, Enterobacter, Serratia:

สายพันธุ์ Citrobacter, Enterobacter และ Serratia เป็นแท่งเคลื่อนที่แกรมลบและเชื้อโรคและเยื่อฉวยโอกาส

พบในลำไส้ของมนุษย์และสัตว์ และในดิน น้ำเสีย และน้ำ

สมาชิกเหล่านี้เติบโตได้ดีในสื่อที่ใช้เป็นประจำ เช่น MacConkey agar, blood agar และสารอาหาร agar

Citrobacters เป็นสารหมักที่หมักช้าหรือไม่มีแลกโตส และ enterobacters ก็คือเครื่องหมักแลคโตส Serratia เป็นสิ่งมีชีวิตที่ไม่หมักแลคโตส Serratia บางสายพันธุ์ผลิตเม็ดสีแดง

สายพันธุ์ที่มีความสำคัญทางการแพทย์ ได้แก่ C. freundii, E. aerogenes, E. cloacae และ S. marcescens

1. การติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ

2. บาดแผล แผลที่ผิวหนัง และการติดเชื้อทางเดินหายใจในผู้ป่วยที่รักษาในโรงพยาบาล

3. ภาวะโลหิตเป็นพิษ: บางคนมีหน้าที่ในการติดเชื้อในเรือนเพาะชำ ห้องไอซียู และห้องเผาไหม้ มักดื้อยาหลายชนิด

ปานกลาง # 3 MacConKey's Agar:

I. เครื่องหมักแลคโตส:

ก.Enterobacteriaceae:

การจำแนกประเภท Enterobacteriaceae มีความซับซ้อนและเป็นที่ถกเถียงกัน มีการเปลี่ยนแปลงอย่างต่อเนื่องในระบบการตั้งชื่ออนุกรมวิธานด้วยการศึกษาความคล้ายคลึงกันของดีเอ็นเอ มีการกำหนดมากกว่า 30 สกุลและ 120 สปีชีส์หรือกลุ่ม ประมาณ 96% ของไอโซเลทที่มีความสำคัญทางการแพทย์อยู่ใน 14 สกุลและประกอบด้วย 38 สปีชีส์

วิธีที่เก่าแก่ที่สุดในการจำแนกแบคทีเรียในลำไส้ขึ้นอยู่กับการหมักแลคโตสและการหมักสมาชิกแลคโตสเรียกว่าถังหมักแลคโตสหรือโคลิฟอร์ม

NS. Escherichia Coli:

สายพันธุ์หลักที่มีความสำคัญทางการแพทย์คือ Esche­richia coli ซึ่งเป็นแบคทีเรียแกรมลบที่เคลื่อนที่ได้

E. coli เป็นสิ่งมีชีวิตปกติในลำไส้ของมนุษย์และสัตว์

UTI, การติดเชื้อที่บาดแผล, เยื่อบุช่องท้อง, การติดเชื้อทางเดินน้ำดี, ภาวะโลหิตเป็นพิษ, เยื่อหุ้มสมองอักเสบในทารกแรกเกิด

กระเพาะและลำไส้อักเสบในทารก (EPEC) โรคท้องร่วงของผู้เดินทาง (ETEC) โรคหลอดเลือดหัวใจตีบ (VTEC) (อาการลำไส้ใหญ่บวมเป็นเลือด โรคเลือดออกในช่องท้อง)

E. coli เป็นสาเหตุสำคัญของภาวะติดเชื้อ:

(ก) การติดเชื้อทางเดินปัสสาวะรวมทั้งโรคกระเพาะปัสสาวะอักเสบ pyelitis และ pyelonephritis

(b) การติดเชื้อบาดแผล, ไส้ติ่งอักเสบ, เยื่อบุช่องท้อง, การติดเชื้อทางเดินน้ำดี

ครั้งที่สอง ท้องเสีย:

แม้จะเป็นพืชในลำไส้ปกติ แต่กลุ่มที่ก่อโรคของ E. coli สี่กลุ่มนั้นได้รับการยอมรับว่าเป็นสาเหตุของอาการท้องร่วง

(ก) Enterotoxigenic E. coli (ETEC):

E. coli ผลิต enterotoxins ที่เป็นสื่อกลางในพลาสมิดหนึ่งหรือสองตัว, enterotoxin ที่ไม่ผ่านความร้อน (LT) และ enterotoxin ที่ทนความร้อนได้ (ST)

LT กระตุ้น adenyl cyclase ในเซลล์เยื่อเมือกของลำไส้เล็ก ซึ่งจะกระตุ้น cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ที่ทำให้เกิดการหลั่งของของเหลวและอิเล็กโทรไลต์มากเกินไปในลำไส้เล็กและทำให้เกิดอาการท้องร่วงเป็นน้ำ ในทางตรงกันข้าม ST ดูเหมือนจะกระตุ้น guanylate cyclase และทำให้เกิดอาการท้องร่วง

(b) Enteroinvasive E. coli (EIEC):

EIEC ทำให้เกิดโรคน้อยกว่า ETEC และบุกรุกเยื่อเมือกของลำไส้ใหญ่และทำให้เกิดโรคบิดเช่นโรคบิดชิเกลลาในทุกกลุ่มอายุ พวกมันไม่เคลื่อนที่และมีลักษณะคล้ายกับสายพันธุ์ชิเกลลาในปฏิกิริยาทางชีวเคมี (NLF) serogroups ที่สำคัญคือ O 124 และ O 164

(c) Enteropathogenic E. coli (EPEC):

EPEC เป็นสาเหตุสำคัญของการระบาดของโรคกระเพาะและลำไส้อักเสบในวัยแรกเกิดในประเทศที่พัฒนาแล้ว

(ง) Verocytotoxigenic E. coli (VTEC):

VTEC ถูกตั้งชื่อเช่นนั้นเนื่องจากผลของพิษต่อเซลล์ไตของ vero-monkey มีสารเวโรไซโตทอกซินที่แตกต่างกันสองชนิด ได้แก่ VT-1 และ VT-2 VTEC ที่พบบ่อยที่สุดคือ serogroup O 157 ที่ทำให้เกิดอาการลำไส้ใหญ่บวมเป็นเลือดออกและกลุ่มอาการฮีโมไลติกยูเรมิกในเด็ก

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

ขึ้นอยู่กับตำแหน่งของตัวอย่างการติดเชื้อซึ่งรวมถึงปัสสาวะ หนอง เลือดและอุจจาระ กรณีเป็นโรคอุจจาระร่วง อาจตรวจอุจจาระเพื่อตรวจหาสารพิษ

E. coli เป็นแท่งเคลื่อนที่แกรมลบ มีบางสายพันธุ์ที่ไม่เคลื่อนที่ (เดิมเรียกว่า Alkalescens dispar group) เชื้ออีโคไลบางสายพันธุ์ถูกห่อหุ้ม

ตัวอย่างได้รับการเพาะเชื้อบนวุ้น MacConkey และแผ่นวุ้นเลือดและฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลานานกว่าปกติ

โคโลนีมีเส้นผ่านศูนย์กลาง 1-4 มม. สีชมพู วงกลม นูน เรียบและไม่เหนียวเหนอะหนะในวุ้น MacConkey (รูปที่ 7.8)

อาณานิคมอาจเป็นเม็ดเลือดแดง

การเติบโตของสื่ออื่นๆ:

สายพันธุ์ส่วนใหญ่ไม่เติบโตหรือยับยั้งอย่างชัดเจนในไซโลส-ไลซีน-ดีออกซีโคเลต (XLD) DCA และวุ้น SS

ปฏิกิริยา IMViC กับ Esch coli คือ: Indole positive methyl red positive, VP negative และ Simmon’s citrate negative (IMViC ++- – )

สิ่งมีชีวิตที่แยกออกมาได้รับการยืนยันโดยการทดสอบการเกาะติดกันและการแบ่งตัว ขั้นแรกด้วยโพลีวาเลนต์ และจากนั้นโดย O antisera จำเพาะแต่ละบุคคล มีการระบุกลุ่มซีโรกรุ๊ปของ ​​E. coli มากกว่า 164 ชนิด แอนติเจน H และ K ของซีโรกรุ๊ปเหล่านี้จำนวนมากได้รับการระบุแล้ว

จำนวนแบคทีเรียในแบคทีเรียในปัสสาวะ:

ในการติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ ตัวอย่างของปัสสาวะตอนกลางและขี้อายที่ยังไม่ได้ปั่นจะถูกฉีดวัคซีนในวุ้น MacConkey & 8217s และเลือด และฟักเป็นเวลาค้างคืนที่ 37°C การประมาณจำนวนสิ่งมีชีวิตต่อมิลลิลิตรของตัวอย่างปัสสาวะที่ยังไม่ได้ปั่นทำได้โดยการนับจำนวนโคโลนีที่เกิดขึ้น

ห่วงของลวดหัวเข็มและเส้นลวดถูกทำขึ้นเพื่อให้ตัวอย่างจำนวนเป็นวงเท่ากับปริมาตร 0.01 มล. เนื่องจากแต่ละอาณานิคมของแบคทีเรียเป็นตัวแทนของลูกหลานของแบคทีเรียเพียงตัวเดียว การนับจำนวนโคโลนีในจานเมื่อคูณด้วย 100 จะทำให้จำนวนแบคทีเรียต่อตัวอย่างหนึ่งมล. เมื่อจำนวนแบคทีเรียเท่ากับ 10 5 (100,000) หรือมากกว่าต่อมิลลิลิตรของปัสสาวะในกรณีที่ติดเชื้อ UTI ที่ไม่ได้รับการรักษา จะเรียกว่าแบคทีเรียในปัสสาวะที่มีนัยสำคัญ

เมื่อจำนวนแบคทีเรียอยู่ระหว่าง 10,000 ถึง 100,000 ต่อมิลลิลิตร การเพาะเลี้ยงอาจถูกทำซ้ำได้ จำนวน 10,000 หรือน้อยกว่าต่อมล. เกิดจากการปนเปื้อนและอายระหว่างการเป็นโมฆะและไม่มีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตาม จำนวนแบคทีเรียใน UTI อาจต่ำกว่า 100,000 ต่อมิลลิลิตร ในเงื่อนไขบางประการเช่น เมื่อผู้ป่วยอยู่ในการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะและในการติดเชื้อ coccal (S. aureus, S. faecalis)

เป็นแท่งแกรมลบแบบแคปซูลที่ไม่เคลื่อนที่และผลิตอาณานิคมของเยื่อเมือกในตัวกลางที่เป็นของแข็ง

มีการกระจายอย่างกว้างขวางในธรรมชาติที่เกิดขึ้นทั้งในปากคนและสัตว์ ทางเดินหายใจส่วนบนและลำไส้ เช่นเดียวกับแซโพรไฟต์ในดิน น้ำ และพืชพรรณ

ทางชีวเคมีและแอนติเจน Klebsiella จัดเป็น:

1. K. pneumoniae - เรียกอีกอย่างว่ายีน K. aero

(ก) K. pneumoniae:

1. การติดเชื้อทางเดินปัสสาวะโดยเฉพาะผู้ที่มาโรงพยาบาล

2. การติดเชื้อทางเดินหายใจ: บางครั้งทำให้เกิดโรคปอดบวม

4. เยื่อหุ้มสมองอักเสบ (โดยเฉพาะในทารกแรกเกิด)

5. ไม่ค่อยมีฝี, เยื่อบุหัวใจอักเสบ, เยื่อบุช่องท้องอักเสบและแผลอื่น ๆ

มันทำให้เกิด rhinoscleroma การเจริญเติบโตของ granulomatous เรื้อรังของจมูกและคอหอย

ทำให้เกิดโอเซน่าในเยื่อบุจมูก ซึ่งเป็นโรคที่มีอาการคัดจมูกซึ่งมีกลิ่นเหม็นและมีการฝ่อของเยื่อเมือกและไชบรานแบบก้าวหน้า

ปัสสาวะ เสมหะ หนอง และเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อ ขึ้นอยู่กับตำแหน่งที่เกิดแผล

แท่งแบบแคปซูลที่ไม่เคลื่อนที่แบบแกรมลบ

โคโลนีขนาดใหญ่และมักเป็นเยื่อเมือก (เนื่องจากการผลิตเมือกนอกเซลล์) บนวุ้น MacConkey และวุ้นเลือด คราบส่วนใหญ่ผลิตโคโลนีสีชมพูและสื่อของ MacConkey เนื่องจากการหมักแลคโตส

เครื่องหมักแลคโตส อินโดลเนกาทีฟ และซิเตรตบวก (ดู Escherichia coli) ปฏิกิริยา IMViC คือ IMViC – – + + สายพันธุ์ Klebsiella ส่วนใหญ่เป็นผู้ผลิตยูรีเอส แต่ช้ากว่าและรุนแรงน้อยกว่าในเรื่องนี้มากเมื่อเทียบกับสายพันธุ์โพรทูส

มีการระบุประเภทแคปซูลมากกว่า 80 ชนิด แนะนำให้ระบุโดยปฏิกิริยา Quelling

การติดเชื้อทางเดินปัสสาวะ:

3. Proteus spp โดยเฉพาะ P. mirabilis

5. บางครั้ง Enterobacter, Citrobacter, Ps. aeruginosa และ Serratia

แบคทีเรียที่สำคัญ:

เมื่อจำนวนแบคทีเรียเท่ากับ 10 5 (100,000) หรือมากกว่าต่อมิลลิลิตรของตัวอย่างปัสสาวะที่ยังไม่ได้ปั่นในกรณีที่ติดเชื้อ UTI ที่ไม่ได้รับการรักษา จะเรียกว่าแบคทีเรียในปัสสาวะที่มีนัยสำคัญ

ห่วงสอบเทียบมาตรฐานที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 3 มม. ที่สามารถเก็บปัสสาวะได้ 1/300 มล. ใช้สำหรับถ่ายโอนตัวอย่างปัสสาวะที่ไม่เจือปนเพื่อฉีดวัคซีนลงในวุ้น MacConkey และวุ้นเลือด จากนั้นแผ่นจะถูกฟักข้ามคืน

ครั้งที่สอง เครื่องหมักที่ไม่ใช่แลคโตส:

เชื้อซัลโมเนลลาส่วนใหญ่พบได้ในลำไส้ของสัตว์ โดยเฉพาะในสุกร วัว แพะ แกะ หนู ไก่ เป็ด และสัตว์ปีกอื่นๆ พวกมันก่อโรคสำหรับเจ้าบ้านและยังทำให้เกิดโรคในมนุษย์ S. typhi และ S. paratyphi ต่างจากเชื้อ Salmonellae อื่น ๆ ในมนุษย์นั้นเป็นเพียงโฮสต์ตามธรรมชาติเท่านั้น

ซัลโมเนลลาสร้างรอยโรคได้ 3 ประเภทหลัก แต่รูปแบบผสมเป็นเรื่องปกติ

2. ไข้รากสาดเทียม — S. paratyphi A, B and C.

(b) อาหารเป็นพิษ (กระเพาะและลำไส้อักเสบ):

2. S. enteritidis เฟสประเภทที่ 4

(c) ภาวะโลหิตเป็นพิษที่มีหรือไม่มีแผลหนองเฉพาะที่:

NS.typhi ถูกกินเข้าไปพร้อมกับอาหารและน้ำที่ปนเปื้อนและขี้อาย จากนั้นสิ่งมีชีวิตจะผ่านจากลำไส้เล็กเข้าสู่กระแสเลือด (transient bacte­remia) ผ่านทางต่อมน้ำเหลือง mesenteric และท่อทรวงอก กระแสเลือดจะถูกล้างอย่างรวดเร็วโดยระบบฟาโกไซติกโมโนและขี้อายในตับ ม้าม และถุงน้ำดี

จากถุงน้ำดี สิ่งมีชีวิตบุกเข้าไปในลำไส้ของ Peyer ทำให้เกิดการอักเสบและเป็นแผล จากนั้นแบคทีเรียจะผ่านเข้าสู่กระแสเลือดซึ่งนำไปสู่ภาวะแบคทีเรียและการติดเชื้อทั่วไป สิ่งมีชีวิตจะถูกขับออกทางอุจจาระและปัสสาวะในสัปดาห์ที่สามและสี่

ในทางการแพทย์ โรคนี้มักไม่รุนแรงกว่าไข้ไทฟอยด์ โดยมีระยะเวลาและระยะฟักตัวสั้นกว่า การติดเชื้อ S. paratyphi A และ C พบได้บ่อยในประเทศเขตร้อน

S. paratyphi C: สาเหตุหลักทำให้เกิดภาวะโลหิตเป็นพิษและแผลที่สำคัญที่เกิดจากสิ่งมีชีวิต ได้แก่ การก่อตัวของฝี โรคข้ออักเสบ และการอักเสบของถุงน้ำดี

3. อาหารเป็นพิษ (ลำไส้อักเสบ):

อาหารเป็นพิษจากเชื้อซัลโมเนลลาเกิดจากการกินอาหารที่ปนเปื้อน เช่น เนื้อสัตว์ ไข่ และนมที่มีเชื้อ S. typhimurium และ S. enteritidis อาการจะเกิดขึ้นภายใน 10-30 ชั่วโมง สายพันธุ์ที่เป็นพิษจากอาหารอาจทำให้เกิดภาวะโลหิตเป็นพิษ การอักเสบของถุงน้ำดีและโรคกระดูกพรุนได้ เชื้อซัลโมเนลลาที่ก่อให้เกิดภาวะโลหิตเป็นพิษในบางครั้งทำให้เกิดรอยโรค pyogenic เฉพาะที่ เช่น กระดูกข้อเข่าเสื่อม เยื่อหุ้มสมองอักเสบ และฝีลึก

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

การเพาะเลี้ยงและการแยกเชื้อซัลโมเนลลาเป็นสิ่งสำคัญในการยืนยันการวินิจฉัย การระบุไอโซเลทขึ้นอยู่กับลักษณะทางชีวเคมีและซีรัมวิทยา ตัวอย่างที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเพาะเลี้ยงจะแตกต่างกันไปตามการนำเสนอ­tation

(a) ในกรณีคลาสสิกของตัวอย่างอุจจาระของเชื้อ Salmonella gastroenteritis นั้นดีที่สุด ผู้ป่วย’ การอาเจียนและอาหารระงับความรู้สึกก็มีประโยชน์เช่นกัน

(b) ในกรณีที่สงสัยว่าเป็นไข้ในลำไส้ การเพาะเลี้ยงเลือดหรือการดูดไขกระดูกมักจะให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวก ต่อมาด้วยการมีส่วนร่วมของลำไส้และไตจะมีการระบุวัฒนธรรมของอุจจาระและปัสสาวะ

ตัวอย่างที่จะทดสอบในระยะต่าง ๆ ของไข้ลำไส้และเปอร์เซ็นต์ของผลบวกแสดงในรูปที่ 7.9 และตาราง 7.11 ภาพเลือดทั่วไปในไข้ลำไส้อาจแสดง leucopenia (จำนวนเม็ดเลือดขาว 2,000-2,500 cumm) กับ lymphocytosis สัมพัทธ์

การแยกตัวของสิ่งมีชีวิต:

ควรเก็บตัวอย่างเลือดหรือไขกระดูกในอุจจาระที่เป็นไข้ลำไส้ อาเจียน หรืออาหารที่น่าสงสัยในโรคกระเพาะและลำไส้อักเสบก่อนเริ่มการรักษา เนื่องจากมีแบคทีเรียชั่วคราว จึงมีสิ่งมีชีวิตจำนวนเล็กน้อยในเลือด จำเป็นต้องมีการเพาะเลี้ยงซ้ำด้วยปริมาณเลือดที่มากขึ้น (5-10 มล.) การเพาะเลี้ยงเลือดมีผลบวกในผู้ป่วย 80-90% ในสัปดาห์แรกและมีไข้สูงสุด 10 วัน

โอกาสของวัฒนธรรมเชิงบวกค่อยๆ ลดลงตามระยะเวลาของการเจ็บป่วยที่เพิ่มขึ้น (รูปที่ 7.9) การเพาะเลี้ยงเลือดยังให้ผลในเชิงบวกในระหว่างการกำเริบของโรค การเพาะเลี้ยงวัสดุไขกระดูกมีความน่าเชื่อถือพอๆ กับวัฒนธรรมเลือด และให้ผลในเชิงบวกใน 1 ถึง 2 วันหลังจากเริ่มการรักษาด้วยคลอแรมเฟนิคอล

ปริมาตร 5 ถึง 10 มล. ของเลือดที่เก็บแบบปลอดเชื้อโดยการเจาะเลือดจะถูกถ่ายโอนโดยตรงไปยังขวดเพาะเลี้ยงเลือดที่ประกอบด้วยน้ำซุปกลูโคส 0.5% 50 ถึง 100 มล. หรือน้ำซุปน้ำดี 0.5% แม้ว่าการเพาะเลี้ยงเลือดในน้ำซุปน้ำดี (อาหารสำหรับเชื้อซัลโมเนลลา) จะเหมาะสมที่สุดสำหรับเชื้อซัลโมเนลลา แต่ในทางปฏิบัติ ห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่ใช้น้ำซุปกลูโคสในการเพาะเชื้อในเลือด เนื่องจากจุลินทรีย์ทั้งหมดรวมถึงซัลโมเนลลาเติบโตในตัวกลาง

ปริมาณสารที่มากขึ้นช่วยในการเจือจางสารต้านแบคทีเรียที่มีอยู่ในเลือด ของเหลว (โซเดียมโพลีเอเนตอลซัลโฟเนต) อาจถูกเติมลงในสื่อที่ต่อต้านการฆ่าเชื้อแบคทีเรียในเลือด

อีกทางหนึ่ง เลือดดำขนาด 5 มล. ที่เก็บแบบปลอดเชื้อ ได้รับอนุญาตให้จับตัวเป็นก้อนในภาชนะสากลที่ปิดฝาเกลียวปราศจากเชื้อ หลังจากถอดซีรั่มแล้ว เกลือน้ำดีสเตรปโทไคเนสน้ำซุปสเตรปโทไคเนส 15 มล. 100 หน่วยต่อมล.) จะถูกเติมโดยปราศจากเชื้อในแต่ละขวด

สเตรปโทไคเนสจะย่อยก้อนทำให้เกิดการสลายและด้วยเหตุนี้แบคทีเรียจึงถูกปล่อยออกมาจากก้อน ซีรั่มที่แยกออกมาใช้สำหรับการทดสอบไวดัล การเพาะเลี้ยงลิ่มเลือดมีอัตราการแยกที่สูงกว่าการเพาะเลี้ยงเลือด เนื่องจากกิจกรรมการฆ่าเชื้อแบคทีเรียของซีรัมถูกมองข้ามไปในเทคนิคนี้

หลังจากการฟักไข่ค้างคืนที่อุณหภูมิ 37°C การเพาะเลี้ยงย่อยจะทำบนวุ้น MacConkey หรือ DCA การเพาะเลี้ยงย่อยจะดำเนินการในเชิงเศรษฐกิจโดยการขยายน้ำซุปหนึ่งรอบในส่วนของสื่อที่เป็นของแข็ง หนึ่งในสี่ของจานเพาะเชื้อขนาด 8.5 ซม. และฟักเป็นเวลา 24-48 ชั่วโมง อาณานิคมไร้สี (NLF) ปรากฏขึ้น วัฒนธรรมอาจถูกละทิ้งเป็นค่าลบหลังจาก 10 วัน

เนื่องจากการเจริญเติบโตอาจล่าช้าและเพื่อขจัดความเสี่ยงของการปนเปื้อนระหว่างวัฒนธรรมย่อยซ้ำ ๆ อาจนำวิธีการเพาะเลี้ยงเลือดของ Castaneda มาใช้ซึ่งให้ทั้งของเหลว (น้ำซุปแช่ตับ) และสื่อที่เป็นของแข็ง (3% ความลาดชันของสารอาหาร) ในหนึ่งเดียว ขวด. เป็นอาหารประเภท Diphasic น้ำซุปมีวุ้นเอียงอยู่ด้านหนึ่ง

2. วัฒนธรรมอุจจาระและปัสสาวะ:

การเพาะเลี้ยงอุจจาระและปัสสาวะเป็นบวกเสมอในช่วงสัปดาห์ที่ 3 และ 4 ของไข้ลำไส้ จำเป็นต้องมีวัฒนธรรมซ้ำ ๆ เพื่อผลลัพธ์ที่เป็นบวก การเพาะเลี้ยงอุจจาระทำเพื่อตรวจจับพาหะเป็นหลัก

3. น้ำลำไส้เล็กส่วนต้นหรือการเพาะเลี้ยงน้ำดี:

น้ำดีได้รับการเพาะเลี้ยงเพื่อตรวจหาพาหะเรื้อรังที่มีสิ่งมีชีวิตอยู่ในทางเดินน้ำดี

ในวุ้น MacConkey หรือ DCA เชื้อซัลโมเนลลาเติบโตเป็นสารหมักที่ไม่ใช่แลคโตส ซึ่งศึกษาเพิ่มเติมโดยการย้อมสีแกรม การเตรียมการเคลื่อนที่ และปฏิกิริยาทางชีวเคมีในตัวกลางที่มีน้ำตาลต่างกัน เพาะเลี้ยงย่อยจากโคโลนีทำในวุ้นสารอาหารเพื่อใช้ทดสอบการเกาะติดกัน

การทดสอบการเกาะติดกันของสไลด์:

(วัฒนธรรมที่ไม่รู้จัก) จากอาณานิคมในวุ้นจะถูกทำให้เป็นอิมัลชันในน้ำเกลือหนึ่งหยดบนสไลด์ด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยไม่ทำให้หยดกระจาย อิมัลชันจะต้องเรียบอย่างแน่นอนและมีความทึบปานกลาง เพิ่ม antiserum เฉพาะกลุ่มเล็ก ๆ หนึ่งวงแล้วผสมโดยการเอียงสไลด์

ในทำนองเดียวกัน มีการเตรียมการควบคุมสารแขวนลอยของแบคทีเรียในน้ำเกลือปกติในสไลด์อื่นและไม่มีการเติมซีรั่มเฉพาะเจาะจง การจับกลุ่มของแบคทีเรียในสไลด์ทดสอบจะเกิดขึ้นภายในไม่กี่นาทีหากปฏิกิริยาของแอนติเจนและแอนติบอดีมีความเฉพาะเจาะจง ควบคุมอิมัลชันน้ำเกลือของแบคทีเรียไม่แสดงการเปลี่ยนแปลงใดๆ

สายพันธุ์ที่เป็นบวกทางชีวเคมี (กล่องที่ 3) ได้รับการทดสอบครั้งแรกด้วยโพลีวาเลนต์ O เซรั่ม ซึ่งทำปฏิกิริยากับสายพันธุ์ซัลโมเนลลาในกลุ่ม A ถึง G โดยที่การเกาะติดกันจะไม่ถูกบล็อกโดยแอนติเจน Vi ซึ่งสามารถตรวจสอบได้โดยการทดสอบสายพันธุ์เชิงลบทั้งหมดโดยใช้เซรั่ม S. typhi Vi . ผลบวกของซีรั่ม polyvalent O บ่งชี้ว่าเป็นโรค Salmonella

ในขั้นตอนต่อไป สายพันธุ์จะได้รับการทดสอบด้วยซีรั่มที่เตรียมต้าน O แอนติเจนของกลุ่มเชื้อซัลโมเนลลาแต่ละกลุ่ม ต่อไปนี้เป็นซีรั่มที่มีประโยชน์มากที่สุดซึ่งทำปฏิกิริยากับปัจจัย 2, กลุ่ม A ปัจจัย 4 และ 5, กลุ่ม B กับ 6 และ 7, กลุ่ม C1 กับ 8, กลุ่ม C2 กับ 9, กลุ่ม D และ 3, 10, 15 และ 19, กลุ่ม อี

เมื่อความเครียดเป็นบวกกับเซรั่ม salmo­nella O แต่ละรายการ และในทางชีวเคมี โดยทั่วไปแล้วจะเป็น S. typhi สายพันธุ์จะถูกทดสอบกับ S. typhi O เซรั่ม ปัจจัยที่ 9 การเกาะติดกันอย่างรวดเร็วบ่งชี้ว่าจุลินทรีย์อยู่ในกลุ่ม Salmonella D. เอกลักษณ์ของมันคือ เป็น S. typhi โดยการเกาะติดกันกับเซรั่มเฉพาะ Salmonella H ซึ่งทำปฏิกิริยากับแฟลเจลลาร์แอนติเจน d.

ในเชื้อซัลโมเนลลาที่ไม่ใช่ไทฟอยด์ สายพันธุ์จะได้รับการทดสอบสำหรับการเกาะติดกันกับซีรั่ม O และ H สำหรับกลุ่ม A, B และ C เมื่อพบซีโรไทป์ที่ผิดปกติ ควรส่งเรื่องเดียวกันไปยัง National Salmonella Reference Center (สถาบันวิจัยกลาง, Kasauli, สำหรับสายพันธุ์มนุษย์ และ Indian Veterinary Research Institute, Izatnagar สำหรับ salmo­nella จากสัตว์)

วิธีการพิมพ์ย่อยมักใช้สำหรับซีโรไทป์ทั่วไป (S. typhi, S. typhi- murium และ S. enteritidis) ซึ่งรวมถึงการพิมพ์ด้วยฟาจ การพิมพ์ทางชีวภาพ และวิธีการสร้างยีนที่นำมาใช้ล่าสุด (การพิมพ์นิ้วพลาสมิด) เทคนิคเหล่านี้ใช้ใน CDC สำหรับการพิมพ์ย่อยภายในซีโรไทป์ของซัลโมเนลลา

เป็นการทดสอบการเกาะติดกันซึ่งตรวจพบว่ามี agglutinins ในซีรัม (H และ O) ในซีรัมของผู้ป่วยที่เป็นไข้ไทฟอยด์และพาราไทฟอยด์ แอนติบอดีซัลโมเนลลาเริ่มปรากฏในซีรัมเมื่อสิ้นสุดสัปดาห์แรกและเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วในช่วงสัปดาห์ที่ 3 ของไข้ในลำไส้

ขอแนะนำให้ทดสอบตัวอย่างซีรั่ม 2 ตัวอย่างในช่วงเวลา 7 ถึง 10 วันเพื่อแสดงระดับแอนติบอดีที่เพิ่มขึ้น ซีรั่มระยะพักฟื้นจากกรณีโรคกระเพาะและลำไส้อักเสบจากเชื้อ Salmonella มักจะเกาะติดการระงับของซีโรไทป์เชิงสาเหตุซึ่งช่วยในการวินิจฉัยย้อนหลัง

ในการทดสอบแบบวิดัล เดิมใช้หลอดสองประเภท: (i) หลอด Dreyer’s (หลอดแคบที่มีก้นกรวย) สำหรับการเกาะติดกันของ H และ (ii) หลอดเฟลิกซ์ (หลอดก้นกลมสั้น) สำหรับ O aggluti­nation ปัจจุบันใช้หลอด Kahn ขนาด 3 x 0.5 มล. สำหรับการเกาะติดกันทั้งสองประเภท

การเจือจางซีรั่มของผู้ป่วย 2 เท่าต่อเนื่องในน้ำเกลือปกติ (1: 20, 1: 40 และอื่นๆ มากถึง 1,280 หรือมากกว่า) ถูกจัดเตรียมในหลอดทดลองขนาดเล็ก (3 x 0.5 มล.) จำนวน 8 หลอดสำหรับแต่ละชุดที่ 7 สำหรับซีรั่มเจือจาง และอันดับที่ 8 สำหรับการควบคุมที่ไม่ใช่เซรั่ม

ไปที่ซีรั่มเจือจางและควบคุมปริมาณน้ำเกลือที่เท่ากัน (0.4 ซีซี) ของสารแขวนลอยแอนติเจน (TH, TO, AH และ BH) ให้เติมและผสมให้ละเอียดโดยการเขย่าตะแกรงแล้วผสมให้ฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 4 ชั่วโมงและอ่านข้อมูลหลังจากนั้น แช่เย็นค้างคืนที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส คนงานบางคนแนะนำให้ฟักไข่ในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37°C ในชั่วข้ามคืน

กอที่หลวมและใยฝ้ายก่อตัวขึ้นในการเกาะติดกันของ H และการสะสมเป็นเม็ดคล้ายแผ่นดิสก์ในการเกาะติดกันของ O ที่ด้านล่างของท่อ หลอดควบคุมแสดงคราบสะสมขนาดเล็ก การเจือจางของ Maxi­mum ของซีรั่มที่เกิดการจับกลุ่มบ่งชี้ระดับของแอนติบอดี

แอนติเจนที่ใช้เป็นประจำคือ H และ O ของ S. typhi, H ของ S. paratyphi A และ B เนื่องจากแอนติเจนข้ามพาราไทฟอยด์ O ทำปฏิกิริยากับไทฟอยด์ O แอนติเจนเนื่องจากการแบ่งปันปัจจัย 12 โดยพวกมัน แอนติเจนของพาราไทฟอยด์ O จะไม่ถูกใช้

การเตรียมแอนติเจน Widal:

H สารแขวนลอยของแบคทีเรียเตรียมโดยการเติมฟอร์มาลิน 0.1% ลงในน้ำซุปหมัก 24 ชั่วโมงหรือสารแขวนลอยน้ำเกลือของการเพาะเลี้ยงวุ้น สำหรับการเตรียมสารแขวนลอย O ของแบคทีเรีย สิ่งมีชีวิตจะถูกเพาะเลี้ยงบนวุ้นฟีนอล (1:800) เชื้อ S. typhi 901 สายพันธุ์ O และ H ถูกนำมาใช้เพื่อจุดประสงค์นี้

การตีความการทดสอบ Widal:

1. Agglutinin เริ่มปรากฏในซีรัมเมื่อสิ้นสุดสัปดาห์ที่ 1 โดยเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วในสัปดาห์ที่ 2 และ 3 และระดับการไตเตรทจะคงที่จนถึงสัปดาห์ที่ 4 หลังจากนั้นจะลดลง

การแสดงให้เห็นการเพิ่มขึ้นของไตเตรทของทั้ง H และ O agglutinins สี่เท่าหรือมากกว่าในช่วงเวลา 4 ถึง 7 วันเป็นเกณฑ์การวินิจฉัยที่สำคัญที่สุด

3. ในการทดสอบครั้งเดียว การไตเตรทของ O หรือมากกว่า 100 และ H agglutinins 200 ระดับแสดงถึงการติดเชื้อที่ลุกลาม แต่ต้องตีความโดยคำนึงถึงปัจจัยต่อไปนี้:

เนื่องจากการติดเชื้อในกลุ่มย่อยของเชื้อ Salmonellosis ในพื้นที่เฉพาะถิ่น ระดับ agglu­tinins ต่ำมีอยู่ในซีรัมของคนปกติ ซึ่งอาจทำให้เกิดปฏิกิริยาในเชิงบวก สิ่งนี้เรียกว่าไตเตรทท้องถิ่น ระดับท้องถิ่นสูงถึง 80 ในโกลกาตาและ 60 ใน Siliguri

ในการสร้างภูมิคุ้มกันด้วยวัคซีน TAB บุคคลที่ได้รับการฉีดวัคซีนอาจแสดงระดับแอนติบอดีสูง (ระดับแอนติบอดี H 160 หรือมากกว่า) ต่อเชื้อซัลโมเนลลาแต่ละตัว

(iii) ปฏิกิริยา Anamnestic:

ผู้ที่เคยติดเชื้อในลำไส้หรือเคยฉีดวัคซีนมาก่อน อาจมีไข้ชั่วคราว เช่น มาลาเรีย ไข้หวัดใหญ่ เป็นต้น

(iv) แอนติเจนที่ไม่จำเพาะ (เช่น แอนติเจน fimbrial) อาจให้ผลบวกที่ผิดพลาด

(v) การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ:

เมื่อเริ่มการรักษาด้วยคลอแรมเฟนิคอลก่อนการปรากฏตัวของ agglutinins จะไม่ปรากฏอาการแย่ลง & ขี้อายหากมีแอนติบอดีอยู่แล้ว จึงไม่คาดว่าจะเพิ่มระดับการไทเทรอีก

การทดสอบในวงกว้างอาจส่งผลลบในพาหะที่มีสุขภาพดีจำนวนมาก และบางตัวต้องตรวจพบโดยการทดสอบการเกาะติดกันของ Vid

2. การทดสอบทางซีรั่มอื่นๆ:

ELISA เป็นวิธีที่ละเอียดอ่อนในการวัดแอนติบอดีต่อ lipopolysaccharide ของ Salmonellae ระดับของแอนติบอดี IgM นั้นสอดคล้องกับระดับของ Widal O ค่อนข้างดี ELISA ในรูปแบบเมมเบรนไหลแนวตั้ง (Typhi- DOT) ตรวจพบ Vi Ag ในเลือด/ซีรัมในระยะเริ่มต้นของโรค

สายพันธุ์ Shigella เป็นปรสิตของมนุษย์และไพรเมตอื่น ๆ เท่านั้นและทำให้เกิดโรคบิดในช่องท้องในมนุษย์

Shigellae เป็นแบคทีเรียแกรมลบที่ไม่เคลื่อนที่ ในทางแอนติเจน shigellae แบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม (A, B, C, D) ตามความจำเพาะของ O แอนติเจน กลุ่มเหล่านี้มีความแตกต่างจากปฏิกิริยาทางชีวเคมีและโครงสร้างแอนติเจนร่วมกัน ปฏิกิริยาการหมักของแมนนิทอลมีความสำคัญ กลุ่ม A เป็นค่าลบของแมนนิทอล และส่วนที่เหลือเป็นผลบวกของแมนนิทอล

สายพันธุ์ Shigella ทำให้เกิดโรคบิดจากแบคทีเรีย (shi­gellosis) การติดเชื้อติดต่อทางอุจจาระและทางปาก S. dysenteriae type 1 (S. shiga) ผลิต exotoxins ที่ทำให้เกิดโรคร้ายแรงที่สุด S. flexneri และ S. boydii ทำให้เกิดโรคบิดที่รุนแรงน้อยกว่าและแพร่หลายในประเทศเขตร้อนรวมถึงอินเดีย S. sonnei เป็นสาเหตุของโรคบิดส่วนใหญ่ในอังกฤษ

สิ่งมีชีวิตเหล่านี้ถูกจับโดยเซลล์เยื่อบุผิวของส่วนปลายของลำไส้ใหญ่ด้วยเนื้อร้ายของเซลล์เยื่อบุผิวที่พื้นผิวซึ่งนำไปสู่การอักเสบเฉียบพลันในแผ่นเยื่อเมือกและเยื่อบุผิว เยื่อบุผิวที่เป็นเนื้อตายทำให้เกิดแผลตื้น ๆ ซึ่งนำไปสู่เยื่อเมือกที่มีเลือดออก

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการ:

เพื่อยืนยันการวินิจฉัย ชิเกลลาต้องถูกแยกในวัฒนธรรมบริสุทธิ์จากตัวอย่างที่เพียงพอ ตัวอย่าง ได้แก่ อุจจาระสด สะเก็ดเมือก และไม้พันทางทวารหนัก

ก. การตรวจอุจจาระด้วยกล้องจุลทรรศน์:

การเตรียมใบปะหน้าในน้ำเกลือและไอโอดีนแสดงให้เห็นเซลล์หนองจำนวนมาก (นิวโทรฟิล) ที่มีนิวเคลียสที่เสื่อมโทรม RBC และมาโครฟาจ ไม่รวมโปรโตซัว ซีสต์ หรือไข่พยาธิ แบคทีเรียฟลอร่าปกติจะลดลงอย่างมาก เทคนิคฟลูออเรสเซนต์แอนติบอดีช่วยในการวินิจฉัยโรคได้อย่างรวดเร็ว แต่โดยทั่วไปมักไม่ปฏิบัติ

B. การตรวจทางแบคทีเรีย:

MacConkey’s agar, DCA, S-S agar, Selenite F broth.

วัสดุจำนวนมากได้รับการฉีดวัคซีนในสื่อที่เลือกเช่น MacConkey’s agar หรือ SS agar media

น้ำซุป Selenite-F (0.4%) ใช้เป็นสารเพิ่มคุณค่าและขนส่งซึ่งช่วยให้เชื้อก่อโรคในลำไส้เติบโตอย่างรวดเร็ว ในขณะที่ชั่วคราว (สำหรับ 9-12 ชั่วโมง) จะยับยั้งการเติบโตของ E. coli สิ่งมีชีวิตจากน้ำซุป selenite-F ได้รับการเพาะเลี้ยงย่อยในวุ้น MacConkey หลังจากการฟักไข่ 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37°C

โคโลนีไร้สีปรากฏบนอาหารวุ้นของ MacConkey หลังจากการฟักไข่ 12 ถึง 18 ชั่วโมง ซึ่งทดสอบเพิ่มเติมโดยการตรวจสเมียร์ การเตรียมการเคลื่อนที่ และปฏิกิริยาทางชีวเคมี Shigellae เป็นแบคทีเรียแกรมลบที่ไม่เคลื่อนที่

ครั้งที่สอง ปฏิกิริยาทางชีวเคมี:

ยูรีส ซิเตรต H2S และ KCN negative indole และ MR positive Gram-negative non-sporing bacillus เป็นการบ่งชี้ถึงสายพันธุ์ shigella (รูปที่ 7.10) S. sonnei เป็นเครื่องหมักแลคโตสตอนปลาย

สาม. การทดสอบการเกาะติดกันของสไลด์:

ทำได้โดยใช้ polyvalent antisera ของสามกลุ่ม (A, B และ C) ของ shigella และ antiserum ของกลุ่ม D (S. sonnei) ทีละกลุ่มกับไอโซเลต แอนติเซราโมโนวาเลนต์ใช้สำหรับกลุ่มที่มีการเกาะติดกันกับแอนติซีราโพลีวาเลนต์ จากนั้นพิมพ์ antisera เฉพาะสำหรับสายพันธุ์ที่อยู่ในกลุ่ม A, B หรือ C สำหรับการทดสอบการเกาะติดกัน

ในบางครั้ง การเกาะติดกันอาจไม่เกิดขึ้นเนื่องจากการกำบังของ O แอนติเจนโดย K แอนติเจน ซึ่งสามารถขจัดออกได้โดยการต้มสารแขวนลอยของแบคทีเรียที่ 100°C เป็นเวลา 60 นาที

ทำสำหรับสายพันธุ์กลุ่ม D

วี อาจทำการทดสอบอย่างสงบเพื่อยืนยันการรุกรานของชิเกลลาสายพันธุ์ที่แยกได้ แม้ว่าจะไม่ค่อยได้ฝึกฝน


อ้างอิง

พัลส์สัน, บี. Ø. ชีววิทยาระบบ: การสร้างและวิเคราะห์ตามข้อจำกัด (สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเคมบริดจ์, เคมบริดจ์, 2015).

O'Brien, E. J. , Monk, J. M. & Palsson, B. O. ใช้แบบจำลองระดับจีโนมเพื่อทำนายความสามารถทางชีวภาพ เซลล์ 161, 971–987 (2015).

เบกเกอร์, S.A. และคณะ การทำนายเชิงปริมาณของเมแทบอลิซึมของเซลล์ด้วยแบบจำลองตามข้อจำกัด: COBRA Toolbox แนท. โพรโทค 2, 727–738 (2007).

Schellenberger, J. และคณะ การทำนายเชิงปริมาณของการเผาผลาญของเซลล์ด้วยแบบจำลองตามข้อจำกัด: COBRA Toolbox v2.0 แนท. โพรโทค 6, 1290–1307 (2011).

Lewis, N. E. , Nagarajan, H. & Palsson, B. O. การจำกัดความสัมพันธ์ของจีโนไทป์และฟีโนไทป์เมแทบอลิซึมโดยใช้สายวิวัฒนาการของวิธีการซิลิโค แนท. รายได้ Microbiol. 10, 291–305 (2012).

Thiele, I. & Palsson, B. Ø. โปรโตคอลสำหรับการสร้างเมตาบอลิซึมระดับจีโนมคุณภาพสูง แนท. โพรโทค 5, 93–121 (2010).

Kitano, H. , Ghosh, S. & Matsuoka, Y. วิศวกรรมสังคมสำหรับ 'วิทยาศาสตร์ขนาดใหญ่' เสมือนจริงในชีววิทยาระบบ แนท. เคมี. ไบโอล. 7, 323–326 (2011).

Bordbar, A. , Monk, J. M. , King, Z. A. & Palsson, B. O. แบบจำลองตามข้อ จำกัด ทำนายการทำงานของเมตาบอลิซึมและเซลล์ที่เกี่ยวข้อง แนท. รายได้ Genet 15, 107–120 (2014).

Maia, P., Rocha, M. & Rocha, I. ในวิธีการเพิ่มประสิทธิภาพความเครียดตามข้อจำกัดซิลิโค: การแสวงหาโรงงานผลิตเซลล์ที่เหมาะสมที่สุด ไมโครไบโอล มล. ไบโอล. รายได้ 80, 45–67 (2016).

เฮฟซี, เอช. และคณะ การสร้างระดับจีโนมฉันทามติของการเผาผลาญเซลล์รังไข่หนูแฮมสเตอร์จีน ระบบเซลล์ 3, 434–443.e8 (2016).

Yusufi, F.N.K. และคณะ เทคโนโลยีชีวภาพของระบบสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเผยให้เห็นการปรับตัวของเซลล์ทั่วโลกในสายเซลล์ CHO ลูกผสม ระบบเซลล์ 4, 530–542.e6 (2017).

Zhuang, K. et al. การสร้างแบบจำลองแบบไดนามิกในระดับจีโนมของการแข่งขันระหว่าง Rhodoferax และ จีโอแบคเตอร์ ในสภาพแวดล้อมใต้ผิวดินที่เป็นพิษ ISME J 5, 305–316 (2011).

Jamshidi, N. & Palsson, B. Ø. ชีววิทยาระบบของเซลล์เม็ดเลือดแดงของมนุษย์ เซลล์เม็ดเลือด อ. 36, 239–247 (2006).

Yizhak, K. , Gabay, O. , Cohen, H. & Ruppin, E. การระบุเป้าหมายยาตามแบบจำลองที่เปลี่ยนการเผาผลาญที่หยุดชะงักและการประยุกต์ใช้กับการแก่ชรา แนท. คอมมูนิตี้ 4, 2632 (2013).

Shlomi, T. , Cabili, M. N. & Ruppin, E. การทำนาย biomarkers เมแทบอลิซึมของข้อผิดพลาดที่เกิดจากการเผาผลาญของมนุษย์ มล. ระบบ ไบโอล. 5, 263 (2009).

Sahoo, S. , Franzson, L. , Jonsson, J. J. & Thiele, I. บทสรุปข้อผิดพลาดโดยกำเนิดของการเผาผลาญที่แมปบนเครือข่ายการเผาผลาญของมนุษย์ มล. ไบโอซิสท์ 8, 2545–2558 (2012).

ธีเอล, I. et al. การฟื้นฟูการเผาผลาญของมนุษย์ทั่วโลกที่ขับเคลื่อนโดยชุมชน แนท. เทคโนโลยีชีวภาพ 31, 419–425 (2013).

Pagliarini, R. & di Bernardo, D. วิธีการสร้างแบบจำลองระดับจีโนมเพื่อศึกษาข้อผิดพลาดแต่กำเนิดของการเผาผลาญของตับ: ต่อผู้ป่วยในซิลิโก เจ. คอมพิวเตอร์. ไบโอล. 20, 383–397 (2013).

Shaked, I. , Oberhardt, M. A. , Atias, N. , Sharan, R. & Ruppin, E. การทำนายเครือข่ายเมตาบอลิซึมของผลข้างเคียงของยา ระบบเซลล์ 2, 209–213 (2016).

Chang, R. L. , Xie, L. , Xie, L. , Bourne, P. E. & Palsson, B. ผลกระทบของยานอกเป้าหมายคาดการณ์โดยใช้การวิเคราะห์โครงสร้างในบริบทของแบบจำลองเครือข่ายเมตาบอลิซึม ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 6, e1000938 (2010).

Kell, D. B. ชีววิทยาของระบบ การสร้างแบบจำลองเมตาบอลิซึม และเมตาบอลิซึมในการค้นคว้าและพัฒนายา ยาดิสคอฟ. วันนี้ 11, 1085–1092 (2006).

Duarte, N. C. และคณะ การสร้างเครือข่ายการเผาผลาญของมนุษย์ทั่วโลกโดยอิงจากข้อมูลจีโนมและบรรณานุกรม Proc. นัท อเคด. วิทย์ สหรัฐอเมริกา 104, 1777–1782 (2007).

สเวนสตัน, N. et al. Recon 2.2: จากการสร้างใหม่สู่แบบจำลองการเผาผลาญของมนุษย์ เมแทบอลิซึม 12, 109 (2016).

Pornputtapong, N. , Nookaew, I. & Nielsen, J. Human Metabolic Atlas: แหล่งข้อมูลออนไลน์สำหรับการเผาผลาญของมนุษย์ ฐานข้อมูล 2015, bav068 (2015).

Zielinski, D. C. และคณะ การวิเคราะห์ทางชีววิทยาของระบบของตัวขับเคลื่อนที่เป็นรากฐานของการเผาผลาญของเซลล์มะเร็ง วิทย์ ตัวแทน 7, 41241 (2017).

Mardinoglu, A. และคณะ แบบจำลองเมแทบอลิซึมในระดับจีโนมของตับเผยให้เห็นการขาดซีรีนในผู้ป่วยโรคไขมันพอกตับที่ไม่มีแอลกอฮอล์ แนท. คอมมูนิตี้ 5, 3083 (2014).

Karlstädt, A. และคณะ CardioNet: เครือข่ายการเผาผลาญของมนุษย์ที่เหมาะสำหรับการศึกษาการเผาผลาญของ cardiomyocyte ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 6, 114 (2012).

Gille, C. และคณะ HepatoNet1: การสร้างเมตาบอลิซึมใหม่ที่ครอบคลุมของตับมนุษย์สำหรับการวิเคราะห์สรีรวิทยาของตับ มล. ระบบ ไบโอล. 6, 411 (2010).

Martins Conde Pdo, R. , Sauter, T. & Pfau, T. การสร้างแบบจำลองตามข้อ จำกัด ไปสู่หลายเซลล์ ด้านหน้า. มล. Biosci. 3, 3 (2016).

Bordbar, A. และคณะ เครือข่ายเมแทบอลิซึมในระดับจีโนมสำหรับการวิเคราะห์สรีรวิทยาของระบบทั้งร่างกาย ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 5, 180 (2011).

Yizhak, K. et al. การสร้างแบบจำลองเมแทบอลิซึมเฉพาะเซลล์ตามฟีโนไทป์เผยให้เห็นภาระเมตาบอลิซึมของมะเร็ง Elife 3, e03641 (2014).

Mardinoglu, A. และคณะ การบูรณาการข้อมูลทางคลินิกกับแบบจำลองการเผาผลาญระดับจีโนมของ adipocyte ของมนุษย์ มล. ระบบ ไบโอล. 9, 649 (2013).

Bordbar, A. และคณะ แบบจำลองทางจลนศาสตร์ของการเผาผลาญทั้งเซลล์ส่วนบุคคลสำหรับการค้นพบในจีโนมและเภสัชพลศาสตร์ ระบบเซลล์ 1, 283–292 (2015).

Shoaie, S. และคณะ การหาปริมาณการเปลี่ยนแปลงการเผาผลาญที่เกิดจากอาหารของไมโครไบโอมในลำไส้ของมนุษย์ Metab ของเซลล์ 22, 320–331 (2015).

Nogiec, C. D. & Kasif, S. เพื่อเสริมหรือไม่เสริม: กรอบโครงข่ายการเผาผลาญอาหารสำหรับผลิตภัณฑ์เสริมอาหารของมนุษย์ PLOS ONE 8, e68751 (2013).

Heinken, A. , Sahoo, S. , Fleming, R. M. T. & Thiele, I. การกำหนดลักษณะเฉพาะระดับระบบของ symbiosis เมแทบอลิซึมของโฮสต์และจุลินทรีย์ในลำไส้ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม จุลินทรีย์ในลำไส้ 4, 28–40 (2013).

Heinken, A. และคณะ แผนที่การเผาผลาญหน้าที่ของ Faealibacterium prausnitziiจุลินทรีย์ในลำไส้ที่เป็นประโยชน์ของมนุษย์ เจ แบคทีเรีย. 196, 3289–3302 (2014).

Magnúsdóttir, S. และคณะ การสร้างโครงสร้างการเผาผลาญระดับจีโนมใหม่สำหรับสมาชิก 773 คนของจุลินทรีย์ในลำไส้ของมนุษย์ แนท. เทคโนโลยีชีวภาพ 35, 81–89 (2017).

Lakshmanan, M. , Koh, G. , Chung, B.K. S. & Lee, D.-Y. ซอฟต์แวร์แอปพลิเคชันสำหรับการวิเคราะห์สมดุลของฟลักซ์ Bioinform สั้น ๆ 15, 108–122 (2014).

Ebrahim, A., Lerman, J.A., Palsson, B.O. & Hyduke, D. R. COBRApy: การสร้างและวิเคราะห์ตามข้อจำกัดสำหรับ Python ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 7, 74 (2013).

Arkin, A. P. และคณะ ฐานความรู้ชีววิทยาระบบพลังงานของสหรัฐอเมริกา แนท. เทคโนโลยีชีวภาพ 36, 566–569 (2018).

Heirendt, L., Thiele, I. & Fleming, R.M. T. DistributedFBA.jl: การวิเคราะห์สมดุลฟลักซ์ระดับสูงและประสิทธิภาพสูงใน Julia ชีวสารสนเทศศาสตร์ 33, 1421–1423 (2017).

Latendresse, M. , Krummenacker, M. , Trupp, M. & Karp, P. D. การสร้างและการทำให้แบบจำลองสมดุลฟลักซ์เสร็จสมบูรณ์จากฐานข้อมูลทางเดิน ชีวสารสนเทศศาสตร์ 28, 388–396 (2012).

Karp, P. D. และคณะ การอัปเดต Pathway Tools เวอร์ชัน 19.0: ซอฟต์แวร์สำหรับข้อมูลทางเดิน/จีโนมและชีววิทยาของระบบ Bioinform สั้น ๆ 17, 877–890 (2016).

Sandve, G. K. , Nekrutenko, A., Taylor, J. & Hovig, E. กฎง่ายๆ 10 ข้อสำหรับการวิจัยเชิงคำนวณที่ทำซ้ำได้ ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 9, e1003285 (2013).

Ince, D. C. , Hatton, L. & Graham-Cumming, J. กรณีเปิดโปรแกรมคอมพิวเตอร์. ธรรมชาติ 482, 485–488 (2012).

Gevorgyan, A. , Bushell, M. E. , Avigone-Rossa, C. & Kierzek, A. M. SurreyFBA: เครื่องมือบรรทัดคำสั่งและส่วนต่อประสานกราฟิกกับผู้ใช้สำหรับการสร้างแบบจำลองตามข้อจำกัดของเครือข่ายปฏิกิริยาเมแทบอลิซึมของจีโนม ชีวสารสนเทศศาสตร์ 27, 433–434 (2011).

Thorleifsson, S. G. & Thiele, I. rBioNet: ส่วนขยายกล่องเครื่องมือ COBRA สำหรับการสร้างเครือข่ายชีวเคมีคุณภาพสูงขึ้นใหม่ ชีวสารสนเทศศาสตร์ 27, 2009–2010 (2011).

Sauls, J. T. & Buescher, J. M. การดูดซึมการสร้างใหม่ของการเผาผลาญระดับจีโนมด้วย modelBorgifier ชีวสารสนเทศศาสตร์ 30, 1036–1038 (2014).

Noronha, A. และคณะ ReconMap: การสร้างภาพแบบโต้ตอบของการเผาผลาญของมนุษย์ ชีวสารสนเทศศาสตร์ 33, 605–607 (2017).

Gawron, P. et al. MINERVA—แพลตฟอร์มสำหรับการแสดงภาพและการดูแลจัดการเครือข่ายปฏิสัมพันธ์ระดับโมเลกุล npj ระบบ ไบโอล. แอปพลิเคชัน 2, 16020 (2016).

Olivier, B. G., Rohwer, J.M. & Hofmeyr, J.-H. S. การสร้างแบบจำลองระบบเซลลูลาร์ด้วย PySCeS ชีวสารสนเทศศาสตร์ 21, 560–561 (2005).

Gelius-Dietrich, G., Desouki, A. A., Fritzemeier, C. J. & Lercher, M. J. Sybil—การสร้างแบบจำลองตามข้อจำกัดที่มีประสิทธิภาพใน R. ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 7, 125 (2013).

หม่า ดี. et al. โซลูชันที่เชื่อถือได้และมีประสิทธิภาพของแบบจำลองระดับจีโนมของเมแทบอลิซึมและการแสดงออกของโมเลกุลขนาดใหญ่ วิทย์ ตัวแทน 7, 40863 (2017).

Klamt, S. , Saez-Rodriguez, J. & Gilles, E. D. การวิเคราะห์โครงสร้างและหน้าที่ของเครือข่ายเซลลูลาร์ด้วย CellNetAnalyzer ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 1, 2 (2007).

Klamt, S. & von Kamp, A. อินเทอร์เฟซการเขียนโปรแกรมแอปพลิเคชันสำหรับ CellNetAnalyzer ไบโอซิสเต็มส์ 105, 162–168 (2011).

Apaolaza, I. และคณะ แนวทางในซิลิโคนเพื่อทำนายและใช้ประโยชน์จากการสังเคราะห์การตายในการเผาผลาญของมะเร็ง แนท. คอมมูน. 8, 459 (2017).

Maranas, C. D. และ Zomorrodi, A. R. วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพในเครือข่ายเมตาบอลิ (ไวลีย์, นิวยอร์ก, 2016).

Chowdhury, A. , Zomorrodi, A. R. & Maranas, C. D. เทคนิคการเพิ่มประสิทธิภาพ Bilevel ในการออกแบบความเครียดทางคอมพิวเตอร์ คอมพ์ เคมี. อังกฤษ 72, 363–372 (2015).

ธีเอล, I. et al. การสร้างแบบจำลองหลายระดับของการเผาผลาญและการสังเคราะห์ระดับโมเลกุลใน อี. โคไล และการประยุกต์ใช้กับวิวัฒนาการของการใช้โคดอน PLOS ONE 7, e45635 (2012).

Feist, A. M. et al. การสร้างใหม่ของการเผาผลาญระดับจีโนมสำหรับ Escherichia coli K-12 MG1655 ที่มี 1,260 ORFs และข้อมูลทางอุณหพลศาสตร์ มล. ระบบ ไบโอล. 3, 121 (2007).

Thiele, I. , Jamshidi, N. , Fleming, R. M. T. & Palsson, B. Ø. การสร้างใหม่ในระดับจีโนมของ Escherichia coliกลไกการถอดความและการแปล: ฐานความรู้ สูตรทางคณิตศาสตร์ และลักษณะเฉพาะของฟังก์ชัน ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 5, e1000312 (2009).

Yang, L. et al. คำจำกัดความทางชีววิทยาของระบบของโปรตีโอมหลักของเมแทบอลิซึมและการแสดงออกนั้นสอดคล้องกับข้อมูลปริมาณงานสูง Proc. นัท อเคด. วิทย์ สหรัฐอเมริกา 112, 10810–10815 (2015).

Bornstein, B.J. , Keating, S. M. , Jouraku, A. & Hucka, M. LibSBML: ไลบรารี API สำหรับ SBML ชีวสารสนเทศศาสตร์ 24, 880–881 (2008).

Aurich, M. K. , Fleming, R.M. T. & Thiele, I. MetaboTools: กล่องเครื่องมือที่ครอบคลุมสำหรับการวิเคราะห์แบบจำลองการเผาผลาญระดับจีโนม ด้านหน้า. Physiol. 7, 327 (2016).

Brunk, E. et al. Recon 3D: ทรัพยากรที่เปิดใช้งานมุมมองสามมิติของการเปลี่ยนแปลงของยีนในการเผาผลาญของมนุษย์ แนท. เทคโนโลยีชีวภาพ. 36, 272–281 (2018).

Ma, D. & Saunders, M. A. การแก้โปรแกรมเชิงเส้นแบบหลายสเกลโดยใช้วิธีซิมเพล็กซ์ในความแม่นยำสี่เท่า ใน การวิเคราะห์เชิงตัวเลขและการเพิ่มประสิทธิภาพฉบับที่ 134 (eds. Al-Baali, M. , Grandinetti, L. & Purnama, A.) 223–235 (Springer International Publishing, Cham, Switzerland, 2015).

Fleming, R. M. T. & Thiele, I. จลนพลศาสตร์เบื้องต้นที่ได้รับการอนุรักษ์ไว้เป็นจำนวนมากเพียงพอสำหรับการดำรงอยู่ของความเข้มข้นของสภาวะคงตัวที่ไม่สมดุล เจ. ทฤษฎี. ไบโอล. 314, 173–181 (2012).

Gevorgyan, A. , Poolman, M. G. & Fell, D. A. การตรวจจับความไม่สอดคล้องกันของปริมาณสารสัมพันธ์ในแบบจำลองชีวโมเลกุล ชีวสารสนเทศศาสตร์ 24, 2245–2251 (2008).

Orth, J. D. , Thiele, I. & Palsson, B. Ø. การวิเคราะห์สมดุลฟลักซ์คืออะไร? แนท. เทคโนโลยีชีวภาพ 28, 245–248 (2010).

Feist, A. M. & amp Palsson, B. O. ฟังก์ชันวัตถุประสงค์ของชีวมวล สกุลเงิน ความคิดเห็น ไมโครไบโอล 13, 344–349 (2010).

Meléndez-Hevia, E. & Isidoro, A. เกมของวัฏจักรเพนโทสฟอสเฟต เจ. ทฤษฎี. ไบโอล. 117, 251–263 (1985).

Orth, J. D. & Palsson, B. Ø. การจัดระบบการสร้างองค์ความรู้ที่ขาดหายไป เทคโนโลยีชีวภาพ บิง. 107, 403–412 (2010).

ยามาดะ, ที. และคณะ การทำนายและการระบุลำดับการเข้ารหัสสำหรับเอ็นไซม์เด็กกำพร้าโดยใช้เพื่อนบ้านจีโนมและเมทาจิโนมิก มล. ระบบ ไบโอล. 8, 581 (2012).

Liberal, R. & Pinney, J. W. คุณสมบัติทอพอโลยีอย่างง่ายทำนายการเข้าใจผิดเกี่ยวกับการทำงานในเครือข่ายเมตาบอลิซึม ชีวสารสนเทศศาสตร์ 29, i154–i161 (2013).

รีด, เจ. แอล. และคณะ แนวทางของระบบในการปรับแต่งคำอธิบายประกอบของจีโนม Proc. นัท อเคด. วิทย์ สหรัฐอเมริกา 103, 17480–17484 (2006).

Orth, J. D. & amp Palsson, B. Gap-filling analysis ของ iJO1366 Escherichia coli การสร้างโครงข่ายเมตาบอลิซึมขึ้นใหม่เพื่อการค้นพบหน้าที่เมตาบอลิซึม ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 6, 30 (2012).

Chang, R. L. และคณะ การสร้างเครือข่ายเมตาบอลิซึมของ คลามีโดโมนาส ให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับการเผาผลาญของสาหร่ายที่ขับเคลื่อนด้วยแสง มล. ระบบ ไบโอล. 7, 518 (2011).

Rolfsson, O., Palsson, บี. Ø. & Thiele, I. การสร้างใหม่ของการเผาผลาญของมนุษย์ Recon 1 ชี้นำสมมติฐานของฟังก์ชันการเผาผลาญของมนุษย์แบบใหม่ ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 5, 155 (2011).

Rolfsson, Ó., Paglia, G., Magnusdóttir, M., Palsson, B. Ø. & Thiele, I. การอนุมานเมแทบอลิซึมของเมแทบอไลต์เด็กกำพร้าของมนุษย์จากบริบทเครือข่ายเมตาบอลิซึมของพวกมันยืนยันกิจกรรมของกลูโคโนคิเนสของมนุษย์ ไบโอเคมี. NS. 449, 427–435 (2013).

Satish Kumar, V. , Dasika, M. S. & amp Maranas, C. D. การเพิ่มประสิทธิภาพตามการดูแลสร้างเมตาบอลิซึมใหม่โดยอัตโนมัติ BMC ชีวสารสนเทศ 8, 212 (2007).

Thiele, I. , Vlassis, N. & Fleming, R. M. T. fastGapFill: การเติมช่องว่างอย่างมีประสิทธิภาพในเครือข่ายเมตาบอลิซึม ชีวสารสนเทศศาสตร์ 30, 2529–2531 (2014).

Willemsen, A. M. และคณะ MetDFBA: รวมการวัดเมตาโบโลมิกส์ที่แก้ไขเวลาเข้ากับการวิเคราะห์สมดุลฟลักซ์แบบไดนามิก มล. ไบโอซิสท์ 11, 137–145 (2014).

Kleessen, S. , Irgang, S. , Klie, S. , Giavalisco, P. & Nikoloski, Z. การบูรณาการข้อมูลการถอดรหัสและเมตาบอลิซึมระบุการตอบสนองการเผาผลาญของ คลามีโดโมนาส เพื่อบำบัดด้วยราพามัยซิน โรงงานเจ 81, 822–835 (2015).

Bordbar, A. และคณะ ชี้แจงสรีรวิทยาการเผาผลาญแบบไดนามิกผ่านการบูรณาการเครือข่ายของเมตาบอลิซึมของหลักสูตรเชิงปริมาณตามเวลา วิทย์ ตัวแทน 7, 46249 (2017).

Blazier, A. S. & amp Papin, J. A. การรวมข้อมูลการแสดงออกในการสร้างเครือข่ายการเผาผลาญระดับจีโนม ด้านหน้า. Physiol. 3, 299 (2012).

Opdam, S. et al. การประเมินอย่างเป็นระบบของวิธีการปรับแต่งแบบจำลองการเผาผลาญระดับจีโนม ระบบเซลล์ 4, 318–329.e6 (2017).

Estévez, S. R. & Nikoloski, Z. กรอบงานทั่วไปสำหรับวิธีการสกัดแบบจำลองเมแทบอลิซึมเฉพาะบริบท ด้านหน้า. วิทยาศาสตร์พืช. 5, 491 (2014).

Vlassis, N. , Pacheco, M. P. & Sauter, T. การสร้างแบบจำลองเครือข่ายเมตาบอลิซึมเฉพาะบริบทอย่างรวดเร็ว ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 10, e1003424 (2014).

Becker, S. A. & amp Palsson, B. O. เครือข่ายเมตาบอลิซึมเฉพาะบริบทสอดคล้องกับการทดลอง ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 4, e1000082 (2008)

Zur, H. , Ruppin, E. & Shlomi, T. iMAT: เครื่องมือวิเคราะห์การเผาผลาญแบบบูรณาการ ชีวสารสนเทศศาสตร์ 26, 3140–3142 (2010).

Agren, R. และคณะ การสร้างเครือข่ายเมแทบอลิซึมที่มีระดับจีโนมขึ้นใหม่สำหรับเซลล์ของมนุษย์ 69 ชนิดและมะเร็ง 16 ชนิดโดยใช้ INIT PLOS คอม ไบโอล. 8, e1002518 (2012).

Jerby, L. , Shlomi, T. & Ruppin, E. การสร้างแบบจำลองการเผาผลาญเฉพาะเนื้อเยื่อโดยใช้คอมพิวเตอร์: การประยุกต์ใช้กับการเผาผลาญของตับของมนุษย์ มล. ระบบ ไบโอล. 6, 401 (2010).

Wang, Y. , Eddy, J. A. & amp Price, N. D. การสร้างแบบจำลองการเผาผลาญระดับจีโนมใหม่สำหรับเนื้อเยื่อของมนุษย์ 126 ชิ้นโดยใช้ mCADRE ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 6, 153 (2012).

Kuhar, M. J. เกี่ยวกับการใช้การหมุนเวียนของโปรตีนและครึ่งชีวิต Neuropsychopharmacology 34, 1172–1173 (2008).

Lajtha, A. & ซิลเวสเตอร์, V. คู่มือสรีรวิทยาและอณูชีววิทยาระดับโมเลกุล (สปริงเกอร์, บอสตัน, 2551).

Schuster, S. & Hilgetag, C. ในโหมดฟลักซ์เบื้องต้นในระบบปฏิกิริยาทางชีวเคมีที่สภาวะคงตัว เจ. ไบโอล. ระบบ 02, 165–182 (1994).

Schilling, C. H. , Letscher, D. & Palsson, B. Ø. ทฤษฎีคำจำกัดความเชิงระบบของวิถีเมแทบอลิซึมและการใช้ในการตีความฟังก์ชันเมตาบอลิซึมจากมุมมองเชิงวิถี เจ. ทฤษฎี. ไบโอล. 203, 229–248 (2000).

Klamt, S. et al. จากโหมดฟลักซ์เบื้องต้นไปจนถึงเวกเตอร์ฟลักซ์เบื้องต้น: การวิเคราะห์เส้นทางเมแทบอลิซึมพร้อมข้อจำกัดฟลักซ์เชิงเส้นตามอำเภอใจ ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 13, e1005409 (2017).

Bordbar, A. และคณะ โครงสร้างวิถีเมแทบอลิซึมที่น้อยที่สุดนั้นสอดคล้องกับปฏิกิริยาทางชีวโมเลกุลที่เกี่ยวข้อง มล. ระบบ ไบโอล. 10, 737 (2014).

Gudmundsson, S. & Thiele, I. การวิเคราะห์ความแปรปรวนฟลักซ์ที่มีประสิทธิภาพเชิงคำนวณ BMC ชีวสารสนเทศ 11, 489 (2010).

Haraldsdóttir, H. S. , Cousins ​​​​, B. , Thiele, I. , Fleming, R. M. T. & Vempala, S. CHRR: ประสานการชนแล้วหนีด้วยการปัดเศษสำหรับการสุ่มตัวอย่างที่สม่ำเสมอของแบบจำลองตามข้อจำกัด ชีวสารสนเทศศาสตร์ 33, 1741–1743 (2017).

Cousins, B. & Vempala, S. Gaussian cooling และอัลกอริธึมสำหรับปริมาตรและปริมาตร Gaussian สยาม เจ. คอมพิวเตอร์. 47, 1237–1273 (2018).

Cousins, B. & Vempala, S. อัลกอริธึมปริมาตรที่ใช้งานได้จริง คณิตศาสตร์. โปรแกรม คอมพ์ 8, 1–28 (2015).

Burgard, A. P. , Pharkya, P. & Maranas, C. D. Optknock: เฟรมเวิร์กการเขียนโปรแกรมแบบสองระดับสำหรับการระบุกลยุทธ์การทำให้ยีนน่าพิศวงสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพความเครียดของจุลินทรีย์ เทคโนโลยีชีวภาพ บิง. 84, 647–657 (2003).

Patil, K. R. , Rocha, I. , Förster, J. & Nielsen, J. การเขียนโปรแกรมเชิงวิวัฒนาการในฐานะแพลตฟอร์มสำหรับวิศวกรรมเมแทบอลิซึมของซิลิโค BMC ชีวสารสนเทศ 6, 308 (2005).

Lun, D. S. และคณะ การระบุกลยุทธ์การออกแบบทางพันธุกรรมในวงกว้างโดยใช้การค้นหาในท้องถิ่น มล. ระบบ ไบโอล. 5, 296 (2009).

Ranganathan, S. , Suthers, P. F. & Maranas, C. D. OptForce: ขั้นตอนการเพิ่มประสิทธิภาพสำหรับการระบุการปรับแต่งทางพันธุกรรมทั้งหมดที่นำไปสู่การผลิตเกินเป้าหมาย ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 6, e1000744 (2010).

Antoniewicz, M. R. และคณะ การวิเคราะห์ฟลักซ์เมตาบอลิซึมในระบบที่ไม่อยู่กับที่: การหมักแบบเลี้ยงด้วยสายพันธุ์ที่ให้ผลผลิตสูงของ อี. โคไล ผลิต 1,3-โพรเพนไดออล เมตาบ อังกฤษ 9, 277–292 (2007).

Haraldsdóttir, H. S. , Thiele, I. & Fleming, R. M. T. การประเมินเปรียบเทียบของซอฟต์แวร์โอเพ่นซอร์สสำหรับการแมประหว่างตัวระบุเมตาโบไลต์ในการสร้างเครือข่ายเมตาบอลิซึมใหม่: แอปพลิเคชันกับ Recon 2 เจ เคมินฟอร์ม. 6, 2 (2014).

Preciat Gonzalez, G.A. และคณะ การประเมินเปรียบเทียบของอัลกอริธึมการทำแผนที่อะตอมสำหรับปฏิกิริยาเมตาบอลิซึมที่สมดุล: การประยุกต์ใช้กับ Recon 3D เจ. เคมินฟอร์ม. 9, 39 (2017).

Kim, S. และคณะ PubChem สารและฐานข้อมูลสารประกอบ กรดนิวคลีอิก 44, D1202–D1213 (2016).

Kanehisa, M. & Goto, S. KEGG: Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes. กรดนิวคลีอิก 28, 27–30 (2000).

เฮสติ้งส์, เจ. และคณะ ฐานข้อมูลอ้างอิงของ ChEBI และภววิทยาสำหรับเคมีที่เกี่ยวข้องทางชีวภาพ: การปรับปรุงสำหรับปี 2013 กรดนิวคลีอิก 41, D456–D463 (2013).

Sud, M. และคณะ LMSD: ฐานข้อมูลโครงสร้าง LIPID MAPS กรดนิวคลีอิก 35, D527–D532 (2007).

Forster, M. , Pick, A. , Raitner, M. , Schreiber, F. & Brandenburg, F. J. สถาปัตยกรรมระบบของระบบ BioPath ในซิลิโก ไบโอล 2, 415–426 (2002).

Williams, A. J. , Tkachenko, V. , Golotvin, S. , Kidd, R. & McCann, G. ChemSpider—สร้างรากฐานสำหรับเว็บเชิงความหมายโดยโฮสต์แพลตฟอร์มฐานข้อมูลที่มาจากฝูงชนสำหรับวิชาเคมี เจ. เคมินฟอร์ม. 2, O16 (2010).

Wishart, D. S. และคณะ HMDB: ฐานข้อมูลเมตาโบโลมของมนุษย์ กรดนิวคลีอิก 35, D521–D526 (2007).

เราะห์มาน, S.A. และคณะ Reaction Decoder Tool (RDT): การแยกคุณสมบัติออกจากปฏิกิริยาเคมี ชีวสารสนเทศศาสตร์ 32, 2065–2066 (2016).

Kumar, A. & Maranas, C. D. CLCA: การสืบค้นโครงสร้างย่อยระดับโมเลกุลทั่วไปสูงสุดภายในฐานข้อมูล MetRxn เจ เคม. ข้อมูล แบบอย่าง. 54, 3417–3438 (2014).

Shimizu, Y. , Hattori, M. , Goto, S. & Kanehisa, M. รูปแบบปฏิกิริยาทั่วไปสำหรับการทำนายปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ไม่รู้จัก ข้อมูลจีโนม 20, 149–158 (2008).

Haraldsdóttir, H. S. & Fleming, R. M. T. การระบุมอยอิตีที่อนุรักษ์ไว้ในเครือข่ายเมตาบอลิซึมโดยการวิเคราะห์เชิงทฤษฎีด้วยกราฟของเครือข่ายการเปลี่ยนอะตอม ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 12, e1004999 (2016).

Klamt, S., Haus, U.-U. & Theis, F. Hypergraphs และเครือข่ายเซลลูลาร์ ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 5, e1000385 (2009).

Fleming, R.M.T. & Thiele, I. von Bertalanffy 1.0: ส่วนขยายกล่องเครื่องมือ COBRA เพื่อจำกัดแบบจำลองการเผาผลาญทางอุณหพลศาสตร์ ชีวสารสนเทศศาสตร์ 27, 142–143 (2011).

Fleming, R. M. T. , Thiele, I. & Nasheuer, H. P. การกำหนดเชิงปริมาณของทิศทางปฏิกิริยาในแบบจำลองการเผาผลาญตามข้อจำกัด: การประยุกต์ใช้กับ Escherichia coli. ชีวฟิสิกส์ เคมี. 145, 47–56 (2009).

Haraldsdóttir, H. S. , Thiele, I. & Fleming, R. M. T. การกำหนดเชิงปริมาณของทิศทางปฏิกิริยาในการสร้างเมตาบอลิซึมของมนุษย์หลายช่อง ชีวฟิสิกส์ NS. 102, 1703–1711 (2012).

Noor, E. , Haraldsdóttir, H. S. , Milo, R. & Fleming, R. M. T. การประมาณพลังงานกิ๊บส์อย่างสม่ำเสมอโดยใช้การมีส่วนร่วมของส่วนประกอบ ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 9, e1003098 (2013).

Fleming, R. M. T. , Maes, C. M. , Saunders, M. A. , Ye, Y. & Palsson, B. Ø. หลักการแปรผันสำหรับการคำนวณฟลักซ์ที่ไม่สมดุลและศักยภาพในเครือข่ายชีวเคมีระดับจีโนม เจ. ทฤษฎี. ไบโอล. 292, 71–77 (2012).

เครา, ดี.เอ., เหลียง, ส.-ดี. & Qian, H. สมดุลพลังงานสำหรับการวิเคราะห์เครือข่ายเมตาบอลิซึมที่ซับซ้อน ชีวฟิสิกส์ NS. 83, 79–86 (2002).

Qian, H. & Beard, D. A. อุณหพลศาสตร์ของเครือข่ายชีวเคมีปริมาณสัมพันธ์ในระบบสิ่งมีชีวิตที่ห่างไกลจากสมดุล ชีวฟิสิกส์ เคมี. 114, 213–220 (2005).

Fleming, R. M. T. , Thiele, I. , Provan, G. & Nasheuer, H. P. แบบจำลองเชิงสัมพันธ์เชิงสัมพันธ์, เทอร์โมไดนามิกและจลนศาสตร์ของเมแทบอลิซึมในสภาวะคงที่ เจ. ทฤษฎี. ไบโอล. 264, 683–692 (2010).

Schellenberger, J. , Lewis, N. E. & Palsson, B. Ø. การกำจัดลูปที่เป็นไปไม่ได้ทางอุณหพลศาสตร์ในแบบจำลองการเผาผลาญในสภาวะคงตัว ชีวฟิสิกส์ NS. 100, 544–553 (2011).

Soh, K. C. & Hatzimanikatis, V. อุณหพลศาสตร์เครือข่ายในยุคหลังจีโนม สกุลเงิน ความคิดเห็น ไมโครไบโอล 13, 350–357 (2010).

Fleming, R. M. T. , Vlassis, N. , Thiele, I. & Saunders, M. A. เงื่อนไขสำหรับความเป็นคู่ระหว่างฟลักซ์และความเข้มข้นในเครือข่ายทางชีวเคมี เจ. ทฤษฎี. ไบโอล. 409, 1–10 (2016).

Aragón Artacho, F.J. , Fleming, R. M. T. & Vuong, P. T. การเร่งอัลกอริทึม DC เพื่อการทำงานที่ราบรื่น คณิตศาสตร์. โปรแกรม. 169, 95–118 (2018).

Artacho, F. J. A. & amp Fleming, R. M. T. อัลกอริธึมที่หลอมรวมกันทั่วโลกสำหรับการค้นหาศูนย์ของการแมปดูโพลโมโนโทน ความเหมาะสม เลตต์. 9, 1–16 (2014).

Ahookhosh, M. , Aragón, F. J. , Fleming, R. M. T. & Vuong, P. T. การบรรจบกันในท้องถิ่นของวิธี Levenberg-Marquardt ภายใต้กฎเกณฑ์ย่อยของ Hölder metric พิมพ์ล่วงหน้าที่ https://arxiv.org/abs/1703.07461 (2017)

แชนนอน, พี. และคณะ Cytoscape: สภาพแวดล้อมซอฟต์แวร์สำหรับโมเดลบูรณาการของเครือข่ายปฏิสัมพันธ์ทางชีวโมเลกุล ความละเอียดของจีโนม 13, 2498–2504 (2003).

King, Z.A. และคณะ Escher: เว็บแอปพลิเคชันสำหรับสร้าง แชร์ และฝังการแสดงภาพเส้นทางชีวภาพที่มีข้อมูลครบถ้วน ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 11, e1004321 (2015).

Kuperstein, I. et al. NaviCell: สภาพแวดล้อมบนเว็บสำหรับการนำทาง การดูแลจัดการ และการบำรุงรักษาแผนที่ปฏิสัมพันธ์ระดับโมเลกุลขนาดใหญ่ ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 7, 100 (2013).

Kostromins, A. & Stalidzans, E. Paint4net: ส่วนขยาย COBRA Toolbox สำหรับการแสดงภาพแบบจำลองปริมาณสัมพันธ์ของเมแทบอลิซึมของเมตาบอลิซึม ไบโอซิสเต็มส์ 109, 233–239 (2012).

Aurich, M. K. และคณะการทำนายสถานะการเผาผลาญภายในเซลล์จากข้อมูลเมตาบอลิซึมนอกเซลล์ เมแทบอลิซึม 11, 603–619 (2014).

Guebila, M. B. & amp Thiele, I. การเพิ่มประสิทธิภาพอาหารตามแบบจำลองสำหรับผู้ป่วยโรคพาร์กินสันระยะสุดท้ายที่รักษาด้วยเลโวโดปา npj ระบบ ไบโอล. แอปพลิเคชัน 2, 16013 (2016).

Sun, Y. , Fleming, R. M. T. , Thiele, I. & Saunders, M. A. การวิเคราะห์สมดุลฟลักซ์ที่แข็งแกร่งของเครือข่ายปฏิกิริยาทางชีวเคมีหลายระดับ BMC ชีวสารสนเทศ 14, 240 (2013).

Lewis, N. E. และคณะ ข้อมูล Omic จากวิวัฒนาการ อี. โคไล สอดคล้องกับการเติบโตที่เหมาะสมที่สุดที่คำนวณได้จากแบบจำลองระดับจีโนม มล. ระบบ ไบโอล. 6, 390 (2010).

Thiele, I. , Fleming, R. M. T. , Bordbar, A. , Schellenberger, J. & Palsson, B. Ø. การกำหนดลักษณะการทำงานของโซลูชันทางเลือกที่เหมาะสมที่สุดของ Escherichia coliเครื่องจักรถอดความและแปลของ ชีวฟิสิกส์ NS. 98, 2072–2081 (2010).

Ballerstein, K. , von Kamp, A. , Klamt, S. & Haus, U.-U. ชุดคัตขั้นต่ำในเครือข่ายเมตาบอลิซึมเป็นโหมดพื้นฐานในเครือข่ายคู่ ชีวสารสนเทศศาสตร์ 28, 381–387 (2012).

von Kamp, A. & Klamt, S. การแจงนับกลยุทธ์การแทรกแซงที่เล็กที่สุดในเครือข่ายการเผาผลาญระดับจีโนม ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 10, e1003378 (2014).

Fujita, K.A. และคณะ บูรณาการวิถีของโรคพาร์กินสันในแผนที่ปฏิสัมพันธ์ระดับโมเลกุล มล. นิวโรไบโอล. 49, 88–102 (2014).

Agren, R. และคณะ กล่องเครื่องมือ RAVEN และการนำไปใช้เพื่อสร้างแบบจำลองการเผาผลาญระดับจีโนมสำหรับ Penicillium chrysogenum. ป.ล. คอมพิวเตอร์ ไบโอล. 9, e1002980 (2013).

Grafahrend-Belau, E. , Klukas, C. , Junker, B. H. & Schreiber, F. FBA-SimVis: การสร้างภาพแบบโต้ตอบของแบบจำลองการเผาผลาญตามข้อจำกัด ชีวสารสนเทศศาสตร์ 25, 2755–2757 (2009).

Rocha, I. และคณะ OptFlux: แพลตฟอร์มซอฟต์แวร์โอเพ่นซอร์สสำหรับวิศวกรรมเมตาบอลิซึมของซิลิโค ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 4, 45 (2010).

Poolman, M. G. ScrumPy: การสร้างแบบจำลองเมตาบอลิซึมด้วย Python ระบบ ไบโอล. 153, 375–378 (2006).

Hoppe, A., Hoffmann, S., Gerasch, A., Gille, C. & Holzhütter, H.-G. FASIMU: ซอฟต์แวร์ที่ยืดหยุ่นสำหรับชุดการคำนวณสมดุลฟลักซ์ในเครือข่ายเมตาบอลิซึมขนาดใหญ่ BMC ชีวสารสนเทศ 12, 28 (2011).

Boele, J., Olivier, B. G. & Teusink, B. FAME, การวิเคราะห์ฟลักซ์และสภาพแวดล้อมการสร้างแบบจำลอง ระบบบีเอ็มซี ไบโอล. 6, 8 (2012).


เสร็จสิ้นการทดสอบ

เนื่องจากผลบวกบางส่วนจากการทดสอบยืนยันอาจเป็นเท็จ ควรทำการทดสอบที่เสร็จสิ้นแล้ว สำหรับหัวเชื้อนี้จากหลอดทดสอบที่เป็นบวกแต่ละหลอดจะมีลายบนจานของ EMB หรือ Endo agar

ในขั้นตอนนี้ กลุ่มตัวอย่างจากหลอด BGLB ที่เป็นบวกแต่ละหลอดจะถูกลากเส้นลงบนสื่อที่เลือกได้ เช่น Eosin Methylene วุ้นสีฟ้า หรือสื่อของ Endo แต่ละจานฟักที่อุณหภูมิ 37°C และอีกแผ่นหนึ่งที่อุณหภูมิ 44.5± 0.2°C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง